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土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性測定試劑盒說明書

                                            微量法 100管/96樣

注    意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。

測定原理：

S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,，利用奈氏試劑檢測氨增加的速率,，即可計(jì)算其酶活性。

需自備儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī),、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍,、研缽,、甲苯、冰和雙蒸水,。

試劑組成和配制：

試劑一×1瓶,，15 mL，4 ℃保存,；

試劑二×1瓶,，40 mL，4 ℃保存,；

試劑三×1瓶,，60 mL，常溫保存,；

試劑四×1瓶,，5 mL，常溫保存,；

試劑五×1瓶,，3 mL，常溫保存,；

試劑六×1瓶,，3 mL,，常溫避光保存。

測定步驟：

1,、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至420nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、樣品測定（在EP管中加入下列試劑）：

混勻,，37℃水浴2 小時(shí)

混勻,，8000 g，25℃離心10 min,；取上清液,，依次加入下列試劑

混勻，室溫靜置15min,，420nm處讀取測定管和對照管吸光值,，

計(jì)算ΔA=A測定管-A對照管。對照管只要做一管,。

注意：試劑六如出現(xiàn)沉淀,，靜置后取上清使用。

酶活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 3.8488x+0.0057,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL）,，y為吸光值A。

單位定義：每g土樣每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位,。

 S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反總÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W,。

V反總：反應(yīng)體系總體積：1.05mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，2h=120min；W：樣本質(zhì)量,，g; 1000,，μmol到nmol換算系數(shù)。

b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 1.9244x+0.0057,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL）,，y為吸光值A。

單位定義：每g土樣每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位,。

 S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反總÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W,。

V反總：反應(yīng)體系總體積：0.525mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，2h=120min,；W：樣本質(zhì)量,，g; 1000，μmol到nmol換算系數(shù),。

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