酸性土壤速效磷試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分,，包括全部水溶性磷,、部分吸附態(tài)磷及有機態(tài)磷，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一,。
測定原理：
用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷,，用鉬銻抗比色法測定。
自備實驗用品及儀器：
天平,、常溫離心機,、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板,、震蕩儀,。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存,。
試劑一：液體6mL×1支,，4℃保存。
試劑二： 粉劑×1支,，4℃避光保存,。臨用前加2mL蒸餾水溶解。用不完的試劑4℃保存,。
試劑三： 粉劑×3支,，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解,。現(xiàn)配現(xiàn)用,。
樣本處理：
新鮮土樣風干，過30-50目篩,，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g土樣,，加入1mL提取液），振蕩提取30min,，10000g ,，25℃離心10min，取上清液待測,。
測定步驟：
1,、 取試劑三一支，加入1mL蒸餾水充分溶解待用,。
2,、 顯色液的配制（可測50個樣）：取EP管一支,，加入660μL試劑一，再加入100μL試劑二,，充分混勻后,，再加入240μL試劑三，充分混勻待用,；配好的顯色液應(yīng)為黃色,，若變藍則為磷污染；顯色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用,；若一次性測不了50個樣，可按比例縮小各試劑體積,。
3,、 操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 40 | |
提取液（μL） | 40 | |
顯色液（μL） | 20 | 20 |
H2O（μL） | 140 | 140 |
充分混勻，25℃靜置30min | ||
于微量石英比色皿/96孔板中,，蒸餾水調(diào)零,，測定660nm處吸光值A，分別記為A空白管和A測定管,，△A=A測定管-A空白管,。空白管只要做一管,。 | ||
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y =0.1252x-0.0041,，R2 = 0.9957，x為標準品濃度（mg/L）,，y為吸光值,。
速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.1252×V樣÷（W×V樣÷V樣總）
= 7.987×（△A+0.0041）÷W
V樣：樣本體積，0.04mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL，W：樣本質(zhì)量,，約0.1g
b. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y =0.0626x-0.0041,，R2 = 0.9957，x為標準品濃度（mg/L）,，y為吸光值,。
速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.0626×V樣÷（W×V樣÷V樣總）
= 15.97×（△A+0.0041）÷W
V樣：樣本體積，0.04mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL，W：樣本質(zhì)量,，約0.1g
注意事項：
1. 配好的顯色液當天用完,，變藍則不能使用,。
2. ΔA線性范圍為：0.01-1.5。
3. 標準曲線線性范圍為：0.1mg/L-20mg/L,。
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