小鼠骨髓瘤細胞
（Sp2/0-Ag14）
細胞介紹
該細胞是由綿羊紅細胞免疫的BALB/c小鼠脾細胞和P3X63Ag8骨髓瘤細胞融合得到的,。該細胞不分泌免疫球蛋白,，對20 μg/ml的8-氮鳥嘌呤有抗性，對HAT比較敏感,；該細胞可以作為細胞融合時的B細胞組分用于制備雜交瘤,；鼠痘病毒陰性。
細胞特性
1） 來源：骨髓瘤
2） 形態(tài)：淋巴母細胞樣,，圓形,，懸浮生長，不要用力吹打(生長時會沉到瓶底）
3） 含量：>1x106 細胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用,。
運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）半貼細胞和貼壁不牢（懸?。┘毎篢25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完培重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收,。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%；雙抗,，1%,。
2） 注意：圓形，懸浮生長,，不要用力吹打(生長時會沉到瓶底）
3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
4） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二． 細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
該細胞輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細胞,，傳代可以參考以下方法：
1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。
3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min,，棄去上清,，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完培以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。
3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例,；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮,。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。
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