小鼠單核巨噬細胞
（J774A.1）
細胞描述
該細胞來源于BABL/cN小鼠,，有抗體依賴的吞噬作用，生長受硫酸葡聚糖,、PPD和LPS的抑制,；可產(chǎn)生IL-1β和大量的溶菌酶。
細胞特性
1） 來源：BABL/cN小鼠淋巴
2） 形態(tài)：單核細胞/巨噬細胞樣,，大多數(shù)貼壁,，少量懸浮,。
3） 含量：>1x106 細胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用。
運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。
3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的情況,，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完培重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM培養(yǎng)基,；優(yōu)質胎牛血清10 %,；P/S青霉素-鏈霉素 1%。
2） 注意事項：
該細胞大多數(shù)是貼壁狀態(tài),，少量的懸浮細胞,。
細胞傳代時使用細胞刮鏟收集細胞。
3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
4） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，完培重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
可以通過將貼壁細胞用細胞刮鏟刮入含有漂浮細胞的培養(yǎng)基中,，通過離心收集細胞,，將細胞沉淀重懸于新鮮培養(yǎng)基中并分配到新的培養(yǎng)瓶中來對細胞進行傳代。建議收貨后的第一次傳代密度為1:2進行,。后續(xù)的傳代可根據(jù)實際情況按1:2~1:4的比例進行,。
3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例,；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程（使用細胞刮鏟收取細胞）收集細胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。
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