甜菜堿（Betaine）含量試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。
測定意義：
甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿,，是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強免疫力,、降血脂,、抗氧化、抗腫瘤,，并可作為甲基供體,，參與促進動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進食欲,、緩和應(yīng)激,、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用,，在化工,、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用,。
測定原理：
甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀,，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰,，測定525nm處的吸光值,，可計算得樣品的甜菜堿含量。
自備實驗用品及儀器：
天平,、離心機,、酶標儀、96孔板,、yi醚,、鹽酸、丙酮和蒸餾水,。
試劑組成和配制：
提取液：液體30mL×1瓶 ,，4℃保存,；
試劑一：粉劑×3瓶，4℃保存,；臨用前根據(jù)用量配制,，每瓶加20mL蒸餾水溶解，加390μL濃鹽酸調(diào)pH為1,。
試劑二：99%yi醚,，自備。取無水yi醚59.4mL,，加入蒸餾水0.6mL,，混勻。
試劑三：70%丙酮,，自備,。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備,，丙酮：蒸餾水=7:3）,。
甜菜堿提取：
取烘干后過40目篩的樣品約0.02g,，加0.8mL水,，置于60℃提取30min，期間不斷震蕩,。再加入200µL提取液,，混勻后10000g，25℃,，離心10min,，取上清液。
測定操作表：
1,、 酶標儀預(yù)熱30min,，調(diào)節(jié)波長至525nm。
2,、 操作表
空白管 | 測定管 | |
上清液（µL） | 300 | |
蒸餾水（µL） | 300 | |
試劑一（µL） | 500 | 500 |
充分混勻,，4℃中反應(yīng)2h，12000rpm,，25℃,，離心10min，棄上清 | ||
試劑二（µL） | 500 | 500 |
混勻,，12000rpm,，25℃，離心10min,，棄上清,。置于通風櫥使殘余yi醚自然揮發(fā)干凈 | ||
試劑三（µL） | 300 | 300 |
震蕩使沉淀充分溶解,，取200µL于96孔板,，記錄標準管和測定管525nm處吸光值A測定與A空白,。ΔA=A測定管-A空白管。 | ||
甜菜堿含量計算公式：
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057,，R2 = 0.9993,；x為甜菜堿濃度（mg/mL），y為吸光值,。
甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷ 0.502× V標準÷(V樣÷V樣總×W)
=1.99×（ΔA-0.0057）÷W
V標準：標準品體積,，0.3mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積,，0.3mL,；V樣總：加入提取液體積，1mL,；W：樣本質(zhì)量,，g
注意事項：
1、 試劑一配制時pH嚴格控制為1,，否則會導(dǎo)致反應(yīng)不wan全,，配制后4℃只能穩(wěn)定幾個小時，配制后盡快使用,。
2,、 試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作,。
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