日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

丙酮酸脫氫酶（Pyruvate dehydrogenase,，PDH）試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                        微量法100管/96樣

注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

PDH（EC 1.2.4.1）廣泛存在于動(dòng)物,、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,，催化丙酮酸脫梭生成羥乙-基-TPP，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來(lái),。

測(cè)定原理：

PDH催化丙酮酸脫氫,，同時(shí)還原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），從而導(dǎo)致600nm光吸收的減少。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。

試劑的組成和配制：

試劑一：100mL×1瓶,，-20℃保存；

試劑二：20mL×1瓶,，-20℃保存,；

試劑三：1.5mL×1支，-20℃保存,；

試劑四：液體20mL×1瓶,，4℃保存；

試劑五：粉劑×1瓶,，4℃保存,；

樣本的前處理：

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線(xiàn)粒體蛋白的分離：

1,、   稱(chēng)取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿,。

2,、   將勻漿600g，4℃離心5min,。

3,、   棄沉淀，將上清液移至另一離心管中,，11000g,，4℃離心10min。

4,、   上清液即胞漿提取物,，可用于測(cè)定從線(xiàn)粒體泄漏的PDH（此步可選做）。

5,、   在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,，超聲波破碎（冰浴,，功率20％或200W,，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次）,，用于線(xiàn)粒體PDH活性測(cè)定,。

測(cè)定步驟：

1、  分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至605nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、  樣本測(cè)定

（1）在試劑五中加入19mL試劑四充分溶解,，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,；

（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑五，混勻,，立即記錄605nm處初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2,，計(jì)算ΔA=A1-A2。

PDH活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

 PDH活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=952×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

PDH活性（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=192×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

PDH活性（nmol/min /10⁴ cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.385×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10^-4 L,；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×10⁴ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.01 mL,；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500萬(wàn)。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

 PDH活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

PDH活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=384×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位,。

PDH活性（nmol/min /10⁴ cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.77×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10^-4 L,；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：96孔板光徑,，0.5cm,；V樣：加入樣本體積，0.01 mL,；V樣總：加入提取液體積,，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，1 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500萬(wàn),。

提供商	優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司	下載次數(shù)	9次
資料大小	130KB	資料類(lèi)型	WORD 文檔 免費(fèi)下載該資料
資料圖片	點(diǎn)擊查看	瀏覽次數(shù)	466次