游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測血清,、動物組織、微生物,、細胞）
微量法100管/96樣
注 意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
游離脂肪酸,，也稱為非酯化脂肪酸，在與白蛋白結合的血漿中循環(huán),。動物血液中的游離脂肪酸 (FFA )含量是一項重要的生理生化指標,。血清中游離脂肪酸的濃度與脂類代謝、糖代謝,、內分泌功能有關,，游離脂肪酸的濃度會因為糖尿病、重癥肝障礙、甲狀腺功能亢進等疾病而上升,。
測定原理：
用有機溶劑萃取FFA,。含有FFA的有機液與三乙醇胺銅反應,在有機相中形成脂肪酸銅 (銅皂) FFA一Cu。Cu離子與顯色液反應形成紫紅色絡合物,。反應形成的顏色深淺與Cu離子濃度的關系符合朗伯一比爾定律,，因此可利用此反應進行比色。
自備的儀器和用品：
酶標儀,、離心機,、可調式移液器、96孔板,、蒸餾水,。
試劑的組成和配制：
萃取液：液體 120 mL×1瓶，4℃保存,；
試劑一：液體 15 mL×1瓶,，4℃保存；
試劑二：液體 15 mL×1瓶,，4℃保存,；
試劑三：粉劑×1瓶，室溫保存,；
試劑四：液體 12 mL×1瓶,，4℃保存；
樣本前處理：
1.動物組織：按照動物組織質量（g）：萃取液mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL萃取液）,，進行冰浴勻漿。震蕩提取15min,，5000 rpm 4℃離心5min,，取有機相待測。
2.血清：吸取50 μL血清樣本,，加入1 mL萃取液,，震蕩提取15 min后，4℃,，5000 rpm離心5 min,，取有機相待測。
3.微生物,、細胞：按照細胞數量（104個）：萃取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1 mL萃取液）加入萃取液,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲2秒,，間隔3秒,，總時間3min）,；震蕩提取15 min，然后5000 rpm 4℃離心5min,，取有機相待測,。
注意：有機相待測液可能存在于上層，也可能存在于下層,，注意觀察,，體積較多的那一層即為有機相待測液。
測定步驟：
1,、 酶標儀預熱30min以上,，調節(jié)波長至550 nm。
2,、 工作液的配制：臨用前根據用量按照試劑一（V）：試劑二（V）：試劑三（m）=1（mL）：1（mL）：0.66（g）的比例充分混勻,。（注意：現用現配，用多少配多少,，在空瓶中配制,，試劑盒中帶有4個空瓶，先將試劑一與試劑二混合,，最后再加入試劑三粉劑）
3,、測定管：吸取600μL樣本，加入200μL工作液,，蓋緊后震蕩20 min，4℃,，5000 rpm離心5 min，分層后取200μL上層有機相,，加入100μL試劑四,，搖勻，10 min后測定550 nm的吸光值,，記為A測定,。
4、空白管：吸取600μL萃取液,，加入200μL工作液,，蓋緊后震蕩20 min,，4℃，5000 rpm離心5 min,，分層后取200μL上層有機相，加入100μL試劑四,，搖勻，10 min后測定550 nm的吸光值,，記為A空白。
空白管只需測一次,。△A=A測定-A空白
注意：1、有機溶劑易揮發(fā),，加入96孔板后應盡快檢測,。
2、測定管中加入的樣本即樣本前處理中的有機相待測液,。
FFA含量計算：
標準曲線：y = 0.0161x - 0.0141 R2 = 0.9985 x：棕櫚酸標準品濃度（nmol/mL）
y：吸光值差值△A
1,、血清FFA含量計算：
FFA含量(μmol/mL)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000
=1.242×(△A+0.0141)
2,、動物組織,、微生物,、細胞中FFA含量計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA含量(μmol/g鮮重)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷（W× V1÷V2）÷1000
=0.062×(△A+0.0141)÷W
（2）按樣本蛋白濃度計算
FFA含量(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V1×Cpr)÷1000
=0.062×(△A+0.0141)÷Cpr
V1：加入樣本體積,，0.6mL,；V2：萃取液體積，1mL,；V3：加入血清（漿）體積,，0.05 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：動物組織樣品質量，g,； 1000：1 μmol=1000 nmol 。
注意事項：
1. 蛋白含量不可直接用萃取液提取的有機相待測液直接測定,，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的BCA法蛋白含量測定試劑盒,。
2. Z低檢出限為20 nmol/mL。
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