膽汁酸（BA）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：
本試劑盒用于測定相關(guān)液體樣本中膽汁酸（BA）的含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中膽汁酸（BA）水平,。用純化的膽汁酸（BA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入膽汁酸（BA）,，和HRP標記的膽汁酸（BA）抗原,，使它們競爭結(jié)合，,，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色,。樣本顏色的深淺和樣品中的膽汁酸（BA）的含量呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中膽汁酸（BA）的含量,。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 |
8 | 標準品S1（6μmol/L） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 標準品S2（3μmol/L） | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3（1.5μmol/L） | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標準品S4（0.75μmol/L） | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5（0.375μmol/L） | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 終止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 說明書 | 1份 |
7 | 樣品稀釋液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2張 |
標本要求
1．標本處理：（1）水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過濾后,，備查
（2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提,，或按相關(guān)文獻提取進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 加樣：分別設(shè)標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
2. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
8. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
檢測范圍：
0.1μmol/L -8μmol/L
規(guī)格：
96份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月
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