血清高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol , HDL-C)試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。
測(cè)定意義:
高密度脂蛋白為血清蛋白之一,主要由肝臟合成,,運(yùn)載周圍組織中的膽固醇,,再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出,是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白,,是冠心病的保護(hù)因子,,俗稱“血管清道夫",對(duì)冠心病的臨床診斷是一個(gè)重要的參考指標(biāo),。
測(cè)定原理:
用沉淀劑分離血清中的高密度脂蛋白膽固醇,,利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇和游離脂肪酸,從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC,;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;再利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,,生成紅色醌類化合物,;在500nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
離心機(jī),,恒溫水浴鍋,、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板,、蒸餾水,。
試劑組成和配制:
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,,4℃保存,。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存,。臨用前加5mL試劑四充分溶解,。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃保存,。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,,4℃保存,。
樣品處理:
取血后3小時(shí)內(nèi)分離血清,,將血清樣品與試劑一按照1:1的比例充分混勻,25℃靜置15min,,2000g離心15min,,上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作表:
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 | |
蒸餾水(μL) | 4 | ||
標(biāo)準(zhǔn)品(μL) | 4 | ||
樣本(μL) | 4 | ||
試劑二(μL) | 150 | 150 | 150 |
試劑三(μL) | 50 | 50 | 50 |
混勻,,37℃靜置30min,,于1mL玻璃比色皿,空白管調(diào)零,,測(cè)定500nm處吸光值A,。分別記為A標(biāo)準(zhǔn)管和A測(cè)定管 |
計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
HDL-C含量(mmol/L)= A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×C標(biāo)準(zhǔn)管
=5×A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)管:5mmol/L
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
HDL-C含量(mmol/L)= A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×C標(biāo)準(zhǔn)管
=5×A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)管:5mmol/L
注意事項(xiàng):
1. 樣本切勿反復(fù)凍融,,最好在取血后12小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定,。
2. 配置好的試劑三4℃保存可半個(gè)月。
3. 線性范圍為0.15mmol/L-3.8mmol/L,。
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優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
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