甘油三酯（triglyceride, TG）含量測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
TG是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,，不僅是細胞膜的主要成分,，也是重要呼吸底物。
測定原理：
用異丙醇提取TG,，脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA）,，甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2,，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,，生成有色化合物，在505 nm處有特征吸收峰,。
自備儀器和用品：
酶標儀,、臺式離心機、可調(diào)式移液槍,、96孔板,、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配置：
試劑一：液體120 mL×1瓶,，4℃保存,。
試劑二：液體12 mL×1瓶，4℃保存,。
試劑三：液體12 mL×1瓶,，4℃避光保存。
TG的提?。?/span>
1,、 組織中TG的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,，8000g，4℃離心10min,，取上清,，即TG待測液。
2,、細胞,、細菌中TG的提取：先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內(nèi),，離心后棄上清,，加1mL試劑一,，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s,，停1s）,，8000g，4℃離心10min,，取上清,，即TG待測液。
3,、血清（漿）樣品：直接測定,。
測定操作：
酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到505 nm,。
試劑（μL） | 空白管 | 測定管 |
樣本 | 10 | |
試劑一 | 10 | |
試劑二 | 95 | 95 |
試劑三 | 95 | 95 |
混勻,，室溫下靜置20min，于505 nm波長處讀取吸光值,，記為A空白和A測定,，△A=A測定-A空白?？瞻坠苤恍铚y一管,。
計算公式：
標準曲線：y = 0.3261x - 0.0199； R2 = 0.9979,；x：標準品濃度（mg/mL） y：吸光值差值ΔA,。
1. 血清（漿）中甘油三酯含量計算：
TG含量（mg/mL）=（ΔA+0.0199）÷ 0.3261=3.07×（ΔA+0.0199）
2. 組織、細菌或細胞中甘油三酯含量計算：
(1)按樣本蛋白濃度計算
TG含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.3261×V樣÷(Cpr×V樣）=3.07×（ΔA+0.0199）÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算
TG含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.3261×V樣÷(W×V樣÷V樣總）=3.07×（ΔA+0.0199）÷ W
V樣：加入樣本體積,，0.01 mL,；V樣總：加入試劑一體積，1 mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,。
注意事項：
1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實驗過程中需佩戴手套和口罩,，試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時蓋緊,。
2. Z低檢出限為100μg/mL。
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