脂肪酶（LPS）活性試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定,。
測定意義：
LPS又稱甘油酯水解酶,，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中,。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌,。
測定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算LPS活性,。
自備儀器和用品：
研缽,、臺式離心機、震蕩混勻器,、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍,、甲苯80mL,、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體65mL×2瓶,，4℃保存,。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存,。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min,。
試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自備）,。
試劑四：液體10mL×1瓶,，4℃保存。
標準品：液體10 μL×1瓶,，10 µmol/mL的標準溶液,，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯,，充分溶解,。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。12000g，4℃離心10min,，取上清置冰上待測,。
2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）,；然后12000g，4℃,，離心10min,，取上清置于冰上待測,。
3. 血清等液體: 直接檢測。
LPS測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,，調(diào)節(jié)波長到710 nm,，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預熱30min,。
3. 在1.5mL EP管中依次加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 空白管 | 測定管 |
蒸餾水 | 150 | |
樣本 | 50 | |
試劑一 | 300 | 300 |
試劑二 | 100 |
37℃振蕩反應10 min
試劑三 | 800 | 800 |
37℃振蕩反應10 min后,，8000g，25℃,，離心10min,，取上清液
試劑名稱（μL） | 空白管 | 測定管 | 標準管 |
上清液 | 400 | 400 | |
標準品 | 400 | ||
試劑四 | 100 | 100 | 100 |
37℃振蕩反應5 min后，靜置5min,，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板,，于710nm處測定吸光值。
注意：空白管和標準管只需測定一次,。
LPS活性計算公式：
1. 組織,、細菌或細胞LPS活性
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標準品×(A測定管-A空白管)÷（A標準- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位,。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標準品×(A測定管-A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]÷W
（3）按照細菌或者細胞數(shù)量計算
活性單位定義：37℃中每104個細胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位,。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標準品×(A測定管-A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷（細胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]÷細胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標準品×(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]
C標準品：10 µmol/mL,；V反總：反應總體積,，0.8mL；V樣：反應中加入樣本體積,，0.05mL,；V樣總：加入提取液體積，1mL,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL，需要另外測定,，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W：樣本質(zhì)量,，g,；T：催化反應時間，10 min,。
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