注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定,。
測定意義：
吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破壞失去活性,。植物體內吲哚乙酸氧化酶活力的大小,，對調節(jié)體內吲哚乙酸的水平，起著重要的作用,，而影響植物的生長,。
測定原理：
在無機酸存在情況下，吲哚乙酸能與FeCl3作用,，生成紅色螯合物,，該物質在530nm處有最大吸收峰，酶活力的大小可以其破壞吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法測定,。
自備儀器和用品：
低溫離心機,、水浴鍋、可調節(jié)移液器,、可見分光光度計/酶標儀,、1.5mL離心管、微量玻璃比色皿/96孔板,、和蒸餾水,。
試劑組成和配制：
試劑一：液體120mL×1瓶，4℃保存,。
試劑二：液體10mL×1瓶,，4℃保存。
試劑三：液體10mL×1瓶,，4℃保存,。
試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存,。
試劑五：液體2mL×1瓶,，4℃避光保存。
試劑六：液體50mL×1瓶,，4℃保存,。臨用前吸取1mL試劑五加入試劑六中混勻，待用,，避光保存
粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。8000g,，4℃離心10min，取上清置冰上待測,。
2. 細菌,、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時間3min）,；然后8000g,，4℃，離心10min,，取上清置于冰上待測,。
3. 血清等液體：直接測定。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,，調節(jié)波長到530 nm,，蒸餾水調零。
2. 試劑二,、試劑三,、試劑四置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中保溫20min。
3. 取1.5mL EP管若干,，按操作依次加入試劑,，操作表如下：
標準管 | 測定管 | |
試劑二（μL） | 20 | 20 |
試劑三（μL） | 20 | 20 |
試劑四（μL） | 40 | 40 |
樣本上清液（μL） | 0 | 20 |
試劑一（μL） | 120 | 100 |
充分混勻后置于30°恒溫水浴中，保溫反應30min,。 | ||
實際六（μL） | 400 | 400 |
充分混勻,，置于30℃黑暗水浴保溫顯色30min。取200μL顯色后呈紅色的反應液于微量玻璃比色皿/96孔板中,，用分光光度計或酶標儀中測定波長530nm處OD值,，標準管記為A1，測定管記為A2 | ||
注意：標準管只需做一次
IAA氧化酶活性計算公式：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
IAA標準曲線公式：y = 1.334x + 0.025 R2 = 0.998 （x為IAA濃度,，mmol /L,；y為吸光值）
（1） 按蛋白濃度計算
酶活定義：從開始時加入的IAA量減去酶作用后殘留的IAA含量，即得被酶所催化的IAA含量,。以每mg酶蛋白在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小,。
U（μmol/h/mg prot）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V樣÷（V樣×Cpr）÷T
=1.5×（A1-A2）÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
酶活定義：以每g樣本在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U（μmol/h/g 鮮重）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V樣÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=1.5×（A1-A2）÷W
（3） 按細胞數量計算
酶活定義：以每1萬個細胞在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小,。
U（μmol/h/104 cell）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V樣÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=1.5×（A1-A2）÷細胞數量
（4） 按液體體積計算
酶活定義：以每mL酶液在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小,。
U（μmol/h/mL）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V樣÷(V樣÷V樣總) ÷T
=1.5×（A1-A2）
V樣總：上清液總體積，1mL,；V樣：加入反應體系中上清液體積,，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣品質量，g,，T：反應時間,，0.5h。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
IAA標準曲線公式：y = 0.667x + 0.025 R2 = 0.998 （x為IAA濃度,，mmol /L,；y為吸光值）
（1）按蛋白濃度計算
酶活定義：從開始時加入的IAA量減去酶作用后殘留的IAA含量，即得被酶所催化的IAA含量,。以每mg酶蛋白在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小,。
U（μmol/h/mg prot）=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V樣÷（V樣×Cpr）÷T
=3×（A1-A2）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
酶活定義：以每g樣本在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U（μmol/h/g 鮮重）=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V樣÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=3×（A1-A2）÷W
（3）按細胞數量計算
酶活定義：以每1萬個細胞在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小。
U（μmol/h/104 cell）=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V樣÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=3×（A1-A2）÷細胞數量
（4）按液體體積計算
酶活定義：以每mL酶液在1h內分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小,。
U（μmol/h/mL）=[(A1-0.025) ÷0.667-(A2-0.025) ÷0.667] ×V樣÷(V樣÷V樣總) ÷T
=3×（A1-A2）
V樣總：上清液總體積,，1mL；V樣：加入反應體系中上清液體積,，20μL=0.02 mL,；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL,；W：樣品質量,，g，T：反應時間,，0.5h,。
注意事項：
Z低檢出限為0.01μmol/mL。
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