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人單純皰疹病毒1型抗體IgG（HSV-1 IgG）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

                                                                  96T

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中單純皰疹病毒1型抗體IgG（HSV-1 IgG）表達(dá),。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人單純皰疹病毒1型抗體IgG（HSV-1 IgG）表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，可與樣品中單純皰疹病毒1型抗體IgG（HSV-1 IgG）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-抗原復(fù)合物,，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中人單純皰疹病毒1型抗體IgG（HSV-1 IgG）的存在與否。

試劑盒組成

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1.         編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）

2.         加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,，

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5,。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.     測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

 臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為單純皰疹病毒1型抗體IgG（HSV-1 IgG）陰性

 陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為單純皰疹病毒1型抗體IgG（HSV-1 IgG）陽性,。

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

  4．  封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

    5．底物請避光保存,。

    6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：12個(gè)月

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