日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                              微量法100T/48S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

測(cè)定意義：                          

胃蛋白酶由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段,。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別,，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張,、慢性十二指腸炎等癥狀時(shí)也會(huì)引起胃蛋白酶分泌的減少,。

測(cè)定原理：

胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍(lán)色,；一定范圍內(nèi),，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量玻璃比色皿/96孔板,、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、研缽、冰和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶,，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存,。臨用前加入10mL試劑二充分溶解,。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存,。臨用前加入10mL蒸餾水充分溶解,。

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存,。臨用前加入15mL蒸餾水充分溶解,。

試劑六：液體3.3mL×1瓶，4℃保存,。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1.27mL×1支,，0.5μmol/mL酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min,，取上清,，即粗酶液。

測(cè)定步驟：

1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到580 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三和試劑四置于37℃水浴預(yù)熱30min,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/96孔板,，加入20μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二,，120μL試劑五,，20μL試劑六，混勻后室溫靜置20min,，于580 nm測(cè)光吸收,，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板,，加入20μL蒸餾水,，40μL試劑二，120μL試劑五,，20μL試劑六,，混勻后室溫靜置20min，于 580 nm測(cè)光吸收,，記為A標(biāo)準(zhǔn)空白管,。

5. 對(duì)照管：取 EP管，加入100 μL蒸餾水,，置于37℃水浴保溫10min；加入100μL試劑四,，蓋緊后搖勻1min,；加入20μL粗酶液，混勻后8000g 4℃離心10分鐘取上清,；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL,，再加入40μL試劑二，120μL試劑五,，20μL試劑六,，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測(cè)光吸收,，記為A空白管,。

6. 測(cè)定管：取 EP管，加入20μL粗酶液，100μL試劑三,，置于37℃水浴保溫10min,；加入100μL試劑四，

蓋緊后搖勻1min,；8000g 4℃離心10分鐘取上清,；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL，再加入40μL試劑二,，120μL試劑五,，20μL試劑六，混勻后室溫靜置20min,，于 580 nm測(cè)光吸收,，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次,。

計(jì)算公式：

a.使用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位,。

胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T

=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位。

胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T

=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度,，0.5 μmol/mL酪氨酸,；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）,，需要另外測(cè)定,；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（mL），20μL=2×10^-2mL,；W：組織質(zhì)量（g）,；V2：粗酶液總體積（mL），1mL,；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min）,，10min。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（（1）按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位,。

胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T

=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個(gè)酶活單位,。

胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T

=27500×（A測(cè)定管－A對(duì)照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μmol/mL酪氨酸,；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11,；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定,；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（mL）,，20μL=2×10^-2mL；W：組織質(zhì)量（g）,；V2：粗酶液總體積（mL）,，1mL,；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），10min,。

注意事項(xiàng)

試劑三,、試劑四、試劑五臨用前配制,，配制好用不完的試劑4℃可保存一周,。

提供商	優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司	下載次數(shù)	7次
資料大小	127KB	資料類(lèi)型	WORD 文檔 免費(fèi)下載該資料
資料圖片	點(diǎn)擊查看	瀏覽次數(shù)	564次