賴(lài)氨酸(lysine，Lys)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100管/96樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
賴(lài)氨酸是人體必需氨基酸之一,，能促進(jìn)人體發(fā)育,、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用,。賴(lài)氨酸為堿性必需氨基酸,。由于谷物食品中的賴(lài)氨酸含量甚低，且在加工過(guò)程中易被破壞而缺乏,，故稱(chēng)為第一限制性氨基酸,。
測(cè)定原理：
蛋白質(zhì)中的賴(lài)氨酸具有一個(gè)游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì),，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴(lài)氨酸的含量成線性關(guān)系,。亮氨酸與賴(lài)氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個(gè)游離氨基(ε-NH2),，所以通常用亮氨酸配制標(biāo)準(zhǔn)液,。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰,、蒸餾水,、水浴鍋。
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶,，4℃保存,；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存,；臨用前加入12.5mL試劑三充分溶解混勻,；
試劑二：液體12.5mL×1瓶，4℃保存,；
試劑三：液體15mL×1瓶,，4℃保存；
試劑四：60%乙醇,，自備。
賴(lài)氨酸提?。?/span>
樣本烘干粉碎,，稱(chēng)取約0.01g樣本，加入1mL提取液,，充分勻漿,。80℃水浴提取20min，冷卻后10000g離心10min,，取上清待測(cè),。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、 工作液的配制：取10mL試劑一與10mL試劑二混合搖勻,，取上清備用。用不完的試劑4℃保存,。
3,、 在有蓋EP管中加入下列試劑：
試劑名稱(chēng)（μL） | 測(cè)定管 | 空白管 |
樣本 | 100 | |
提取液 | 100 | |
工作液 | 200 | 200 |
混勻，80℃水浴30min（蓋緊,，以防止水分散失）,，冷卻至常溫。
試劑四 | 300 | 300 |
混勻,，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,，于530nm波長(zhǎng)處記錄吸光值A。△A=A測(cè)定管-A空白管,。
空白管只要做一管,。
賴(lài)氨酸含量計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0062x - 0.0212,；x為賴(lài)氨酸含量（µg/mL），y為吸光值,。
1.按照蛋白濃度計(jì)算
賴(lài)氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
賴(lài)氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.1mL；V2：加入提取液體積,，1 mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；1.1515,，校正系數(shù),。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0031x - 0.0212；x為賴(lài)氨酸含量（µg/mL）,，y為吸光值,。
1.按照蛋白濃度計(jì)算
賴(lài)氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
賴(lài)氨酸含量(µg/g干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷W
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL,；V2：加入提取液體積,，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；1.1515,，校正系數(shù)。
提供商 |
優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
29次 |
資料大小 |
129.5KB | 資料類(lèi)型 |
WORD 文檔 |
資料圖片 |
點(diǎn)擊查看 | 瀏覽次數(shù) |
594次 |
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
4
立即詢(xún)價(jià)
您提交后,，專(zhuān)屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)