人細(xì)小病毒 B19 (HPV B19)核酸檢測(cè)試劑盒（熒光 PCR 法）

商品名稱：人細(xì)小病毒 B19（HPV B19）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法) 

Name ：Human parvovirus B19 Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

人細(xì)小病毒 B19(B19)在 1974 年首ci被發(fā)現(xiàn),，是細(xì)小病毒科(Parvoviridae)中已知的兩種感染人的病毒之一,。

B19 病毒在人群中分布廣泛，感染后的臨床癥狀隨宿主的免疫系統(tǒng)和血液狀況的不同而不同,，它主要引起兒童的傳染性紅斑和成年人的急性對(duì)稱關(guān)節(jié)炎,，也能引發(fā)胎兒死亡、胎兒水腫,、胎兒先天性貧血,。

本試劑盒適用于檢測(cè)血液中的人細(xì)小病毒，用于人細(xì)小病毒感染的輔助診斷,。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),，設(shè)計(jì)一對(duì)人細(xì)小病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性探針,， 用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)人細(xì)小病毒的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,，避光保存,、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次,，有效期 12 個(gè)月,。

【適用儀器】

ABI7500 、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler,、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀,。

【標(biāo)本采集】

抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管,。

【保存和運(yùn)輸】

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò) 24 h；若需長(zhǎng)期保存,，應(yīng)放置-70℃以下保存,，凍融不超過(guò) 3 次。

【使用方法】

1.  樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1  樣本前處理

取全血或血清 100μL 進(jìn)行提取,。

1.2  核酸提取

推薦采用優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取,，請(qǐng)    按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.  試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照,；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份),，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，20μL/管,。

3.  加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 5μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,， 短暫離心。

4.  PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1  將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2  設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇

ROX 參比熒光,，選擇 None 即可,。

4.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

5.  結(jié)果分析判定

5.1  結(jié)果分析條件設(shè)定（請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行設(shè)置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值,、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整，Start 值可設(shè)在 3～15,、End 值可設(shè)在 5～20,，使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期，陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線）,，點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果。

5.2  結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤40,，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>40 或無(wú) Ct 值。

5.3  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示,；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效,。

6.   檢測(cè)方法的局限性

1. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理,、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

2. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,；

3. 陽(yáng)性對(duì)照,、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

4. 病原體在流行過(guò)程中基因突變,、重組,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

7. 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段,。

【注意事項(xiàng)】

1. 所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,；

2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，wan全混勻并短暫離心,；

3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5. 使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6. 樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染,；

7. 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器,；

8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理,。

【參考文獻(xiàn)】

[1]黃玉. 人細(xì)小病毒 B19 非結(jié)構(gòu)蛋白 NS1 核輸出機(jī)制研究[D].華中師范大學(xué),2014.

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