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C18液相色譜柱的使用注意簡述
閱讀：1359 發(fā)布時間：2022-8-15
在選用色譜柱時,，應(yīng)充分考慮所分析樣品的極性大小,、化合物的種類數(shù)量,、結(jié)構(gòu)特征。根據(jù)化合物的性質(zhì),，選擇合適的色譜柱和分析條件,。不同類型的色譜柱使用的流動相不同，使用錯誤的流動相會降低柱效,，損傷柱子,。如分析極性較大的多糖類成分，應(yīng)當(dāng)采用親水性的反相填料,。對于*次使用的色譜柱,，還應(yīng)按照廠家的出廠說明對色譜柱進(jìn)行低流速的沖洗活化，活化后的色譜填料共價鍵鍵合力增強(qiáng),，柱效提高,，壽命延長。
在使用液相色譜C18儀柱過程中,，須注意以下事項(xiàng)：
1,、新C18色譜柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗,，作用是使固定相能充分潤濕,、碳鏈?zhǔn)嬲梗股V柱的性能達(dá)到好狀態(tài),。具體操作是,，將配制好65%的乙腈/水沖洗后,，把色譜柱進(jìn)口端連接在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測器,，以免污染了檢測器）,，以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干，過20分鐘后再接上檢測器,，以1.0ml/min的流速，繼續(xù)沖洗2~8小時,；
2,、液相色譜儀檢測分析樣品完畢后，須沖洗色譜柱,。尤其是流動相中含有酸或鹽時,，需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積,；
3,、若色譜柱處于長期閑置狀態(tài)時，要將色譜柱沖洗,，建議沖洗3-4小時以上,，后保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液（如90%甲醇水）中；
4,、由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng),，在使用過程中盡量不要使用高水相條件，若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷,，引起柱效迅速下降,，甚至造成不可逆的負(fù)面影響；由于碳載量高,，表現(xiàn)尤為明顯,，建議使用過程中水相比例不超過90%；
5,、色譜柱壓力升高,、柱性能下降：通常為色譜柱被污染，對色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效,；
6,、色譜柱壓力驟升：通常由鹽析出或篩板堵塞引起，若是鹽析出,，用10%甲醇水低流速沖?洗至壓力恢復(fù)即可,；若判斷并非鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動相反沖色譜柱（將色譜柱反接,，不接檢測器）,，若反沖半小時仍無效果則說明反沖無效,，需尋找其他原因。