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液相色譜柱使用前準備工作介紹
閱讀：821 發(fā)布時間：2022-7-15
液相色譜柱，是一種用于液體色譜分析儀器,。
使用前準備
1,、使用前認真閱讀色譜柱的說明書，了解色譜柱的種類,，選用合適的色譜柱,。
在選用色譜柱時，應(yīng)充分考慮所分析樣品的極性大小,、化合物的種類數(shù)量,、結(jié)構(gòu)特征。根據(jù)化合物的性質(zhì),，選擇合適的色譜柱和分析條件,。不同類型的色譜柱使用的流動相不同，使用錯誤的流動相會降低柱效,，損傷柱子,。如分析極性較大的多糖類成分，應(yīng)當采用親水性的反相填料,。對于**使用的色譜柱,，還應(yīng)按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化，活化后的色譜填料共價鍵鍵合力增強,，柱效提高,，壽命延長。
2,、樣品的準備與預(yù)處理
我們的經(jīng)驗是樣品純化得越干凈,，色譜柱的使用壽命越長。許多樣品，尤其是生物樣品,，組份非常復(fù)雜,，對色譜柱的損傷性較大，不經(jīng)預(yù)處理的樣品直接分析,，會嚴重縮短色譜柱的使用壽命,。因此，在樣品的準備時需對樣品進行預(yù)處理,，包括準備溶劑的選擇,、樣品過濾等。
2.1 制樣溶劑的選擇
制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性,、與流動相的相溶性,、色譜填料的適用性等方面。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性,，而且與流動相溶,，洗脫強度*好低于流動相或梯度洗脫中的起始流動相，以免影響樣品分離,。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO,、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品,，這些溶劑會破壞固定相的結(jié)構(gòu),，從而縮短色譜柱的使用壽命。此外,，制樣溶劑還應(yīng)與色譜系統(tǒng)其他部件如高壓泵,、進樣器等相適用。
2.2 制樣溶劑過濾
在進樣前需過濾樣品溶液,，如采用0.22μm的微孔濾膜除去不溶性微粒,，以免堵塞柱頭濾片及柱內(nèi)填充床。在條件允許的情況下,，*好采用與色譜柱同種填料的固相萃取柱過濾進樣溶液,，可以減少在色譜柱上死吸附的物質(zhì)或易堵塞的大分子樣品。如生物樣品中的小極性的油脂類易于沉淀死吸附在C18反相色譜柱中,，導(dǎo)致柱效降低,、柱壓升高。采用SPE柱過濾后,，可以有效減少在色譜柱中附著沉積的死吸附成分，保護色譜柱不被污染,，保證其使用壽命,。
2.3 其他，如溶液濃度、進樣量等
分析物的某些性質(zhì)同樣能影響色譜柱的使用壽命,。強酸,、強堿性物質(zhì)和蛋白質(zhì)類生物大分子，它們能與固定相填料作用,，或生成不可逆吸附層,，改變填料表面特征，使色譜柱性能發(fā)生變化,，導(dǎo)致分離失效,。此外樣品的進樣量過大、超載都會影響色譜柱的分離性能和使用壽命,。