您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
液相分析中如何選擇液相色譜柱
伴隨色譜技術(shù)的突飛猛進(jìn),，色譜柱層出不窮,，C18鍵合填料是否封尾,、雜化官能團(tuán)的鍵合,、高強(qiáng)度硅膠的使用······色譜柱的填料沒有成千，也有上百,。到底該如何選擇等效柱呢,？我們憑什么說這兩根柱子是等效的。可以說,，色譜柱是色譜分析過程中最重要的部分,，相當(dāng)于人體的“心臟"。根據(jù)自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱,，需要考慮不同參數(shù)將會造成什么影響,。比如色譜柱尺寸：柱長、內(nèi)徑,；色譜柱填料：粒徑、孔徑,、比表面積,、基質(zhì)及其表面特征、載碳量鍵合相類型,。
查詢USP
如果藥物在USP中有收載,，可以利用USP直接進(jìn)行查： 數(shù)據(jù)庫如下：直接點(diǎn)擊標(biāo)紅下拉列表，簡單選擇一款色譜柱,，以Zorbax Eclipse XDB C18為例,。
網(wǎng)頁會自動根據(jù)色譜柱的相似性生成列表 其中F表示代表色譜柱比對函數(shù)，值越低代表相似性越好,。那么,，列表上方的Hy、CTF,、CFA,、TFA、BD分別代表什么意思呢,？首先這些參數(shù)是USP方法中常使用的
在日常液相分析中,，正確選擇適合自己實(shí)驗的色譜柱，將會使得你的實(shí)驗事半功倍,！
色譜柱參數(shù)--- 柱長
兩支同填料的色譜柱,，柱長越長，分離時間越長,，但柱越長分離度將會更好,，同時柱壓也將更大，可結(jié)合樣品的復(fù)雜性和希望的分離時間來選擇合適的柱長,，一般為2.0~250mm,。
色譜柱參數(shù)--- 內(nèi)徑
窄徑柱可提高柱的靈敏度，并可明顯降低溶劑的使用量,；
寬徑柱可以將系統(tǒng)死體積的影響降到zui低,，載樣量高，抗污染。
色譜柱參數(shù)--- 粒徑
例如：1.8μm,、3μm,、5μm、10μm等,，粒徑越小,，分離越快，柱效越高,。但柱壓力越高,，柱容易被污染，壽命低,。
色譜柱參數(shù)--- 孔徑
孔徑小,，含孔率高，則比表面積大,，載碳量高,。
色譜柱參數(shù)--- 比表面積
例如：180㎡/g、320㎡/g等（Ultimate系列為320㎡/g）,，選擇適合目標(biāo)物的比表面積,，每克填料的表面積（與粒度、含孔率有關(guān)),，比表面積大,，會增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保留,、載樣量增加,比表面積小可以縮短分析時間和梯度時的平衡時間,。
色譜柱參數(shù)--- 載碳量
例如：10%、14%,、17%,、23%等，載碳量通常影響選擇性,。硅膠表面鍵合相的比例,，與比表面積，鍵合覆蓋度等有關(guān),。載碳量高,，則保留增加，適合分析非極性化合物,。制備色譜的上樣量也可以增加,。
色譜柱參數(shù)--- 硅膠基質(zhì)
1. 硅膠基質(zhì)色譜柱較其他材料制成的柱子有更高的柱效；
2. 硅膠機(jī)械強(qiáng)度好,；
3. 硅膠表面可化學(xué)修飾制成具有各種官能團(tuán)的鍵合相,；
4. 硅膠填料不會發(fā)生體積的變化,；
5. 硅膠在高pH值下會溶解；
6. 硅膠表面酸性,，在分離堿性化合物時容易產(chǎn)生拖尾,。
色譜柱參數(shù)--- 聚合物基質(zhì)填料
1. 交聯(lián)苯乙烯/二乙烯基苯、甲ji苯烯酸酯等,；
2. pH穩(wěn)定性好：pH1-14,；
3. 可以在很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行表面化學(xué)處理以滿足反相色譜、離子交換色譜,、疏水作用色譜和體積排阻色譜的需求,；
4. 在中等pH條件下對強(qiáng)堿性物質(zhì)具有更好的峰形；
5. 填料的體積隨著流動相的不同而改變,，如膨脹或收縮,；
6. 分離效率相對硅膠而言比較低；
7. 重現(xiàn)性不好,；
8. 機(jī)械強(qiáng)度差,。
色譜柱參數(shù) --- 硅醇基
硅醇基的酸性較大,，可與堿性化合物由于靜電作用力而牢固的結(jié)合,，因此含有較多殘留硅醇基的填料在分離堿性化合物時容易產(chǎn)生拖尾、變寬,、保留延長等現(xiàn)象,。
如何屏蔽剩余硅羥基的影響：加入適當(dāng)?shù)膾呶矂┤缛野房梢匝诒螝埩舻墓枇u基，使堿性化合物峰形變好,；降低流動相pH值小于3,，可以減小硅醇基的反應(yīng)，從而減小拖尾現(xiàn)象,?；蛘哌x擇優(yōu)先使用雙封尾的色譜柱。
色譜柱參數(shù) --- 封尾
為了降低硅醇基的影響,，需要對色譜柱進(jìn)行封尾,，通常為鍵合填料與小硅烷（如：三甲基硅烷）進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)，屏蔽掉部分殘留硅醇基,。
封尾的目的：1.屏蔽殘留的硅醇基,；2.改善選擇性。
色譜柱參數(shù) --- 鍵合相的分類
鍵合相：反相（70%）,；C18（65%）,；C8（15%）；Cyano（5%）,；苯基柱（<5%）,；正相（20%；硅膠、-NH2,、-CN）,；其它（10% ；手性柱,、離子交換柱）,。
同一廠家相同硅膠基質(zhì)的反相柱：保留值隨著碳載量的增加而增加；鍵合碳鏈越長,，保留越大,，C18≈C8＞C4＞C1，長鏈之間差異不大,，根據(jù)待分析物質(zhì)的性質(zhì),，選擇合適的鍵合相和分離模式。