樣品預(yù)處理的目的分為以下幾個:除去微粒、減少干擾雜質(zhì),、濃縮微量組分,、提高檢測靈敏度及選擇性、改善分離效果,、有利于色譜柱和儀器的保護等,。
由于樣品種類繁多,其組成、濃度,、物理形態(tài)等均是色譜分析測定的重要影響因素,。樣品處理技術(shù)就成為提高分析測定效率、改善和優(yōu)化色譜分析的重要環(huán)節(jié)
樣品預(yù)處理,,是指在抽提純化核酸或蛋白質(zhì)之前,,對細胞結(jié)構(gòu)進行破壞,使生物大分子充分釋放出來的過程,。生物大分子組成極為復(fù)雜,,含量千差萬別,易失活,,影響分離的因素多,,因此方法選擇尤為重要。
溶劑提取法
同一溶劑中,,不同物質(zhì)具有不同的溶解度,。利用混合物中各物質(zhì)溶解度的不同將混合物組分*或部分分離的過程稱為萃取,也稱提取,,常用方法有以下幾種:
1,、浸提法
浸提法又稱浸泡法。用于從固體混合物或有機體中提取某種物質(zhì),,所采用的提取劑,,應(yīng)既能大量溶解被提取的物質(zhì),又要不破壞被提取物質(zhì)的性質(zhì),。為了提高物質(zhì)在溶劑中的溶解度,,往往在浸提時加熱。如用索氏抽提法提取脂肪,。提取劑是此類方法中重要因素,,可以用單一溶劑,也可以用混合溶劑,。
2,、溶劑萃取法
溶劑萃取法用于從溶液中提取某一組分,利用該組分在兩種互不相溶的試劑中分配系數(shù)的不同,,使其從一種溶液中轉(zhuǎn)移至另一種溶劑中,,從而與其他組分分離,達到分離和富集的目的,。通??捎梅忠郝┒范啻翁崛∵_到目的,。若被轉(zhuǎn)移的成分是有色化合物,,可用有機相直接進行比色測定,即萃取比色法。萃取比色法具有較高的靈敏度和選擇性,,如,,雙硫腙法測定食品中的鉛含量。此法設(shè)備簡單,、操作迅速,、分離效果好,但是,,成批試樣分析時工作量大,。同時,萃取溶劑常易揮發(fā),,易燒,,且有毒性,操作時應(yīng)加以注意,。
鹽析法
向溶液中加入某種無機鹽,,使溶質(zhì)在原溶劑中的溶解度大大降低,而從溶液中沉淀析出,,這種方法叫做鹽析,。如在蛋白質(zhì)溶液中加入大量的鹽類(硫酸銨),特別是加入重金屬鹽,,使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀出來,。
在進行鹽析工作時,應(yīng)注意溶液中所加入的物質(zhì)的選擇,。它應(yīng)是不會破壞溶液中所要析出的物質(zhì),,否則達不到鹽析提取的目的。
濃縮法
食品樣品經(jīng)提取,、凈化后,,有時凈化液的體積較大,被測組分的濃度太低,,會影響最后結(jié)果的測定,。此時需要對被測樣液進行濃縮,以提高被測成分的濃度,。常用的方法有常壓濃縮和減壓濃縮兩種:
1,、常壓濃縮法
常壓濃縮法只能用于待測組分為非揮發(fā)性的樣品試液的濃縮,否則會造成待測組分的損失,。操作可采用蒸發(fā)皿直接揮發(fā),。如果溶劑需要回收,則可用一般蒸餾裝置或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,。該法操作簡便,、快速,,是常用的方法。
2,、減壓濃縮法
減壓濃縮法主要用于待測組分為熱不穩(wěn)定性或易揮發(fā)的樣品凈化液的濃縮,,其樣品凈化液的濃縮需采用K-D濃縮器。濃縮時,,水浴加熱并抽氣減壓,,以便濃縮在較低的溫度下進行,且速度快,,可減少被測組分的損失,。食品中有機磷農(nóng)藥的測定多采用此法濃縮樣品凈化液。
化學(xué)分離法
1,、磺化法和皂化法
這是處理油脂或脂肪樣品時經(jīng)常使用的方法,。例如,殘留農(nóng)藥分析和脂溶性維生素測定中,,油脂被濃硫酸磺化,,或被堿皂化,由疏水性變成親水性,,使油脂中需檢測的非極性物質(zhì)能較容易地被非極性或弱極性溶劑提取出來,。
2、沉淀分離法
沉淀分離法是利用沉淀反應(yīng)進行分離的方法,。在試樣中加入適當(dāng)?shù)某恋韯?,使被測組分沉淀下來,或?qū)⒏蓴_組分沉淀除去,,從而達到分離的目的,。
3、掩蔽法
利用掩蔽劑與樣液中的干擾成分作用,,使干擾成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴桓蓴_測定的狀態(tài),,即被掩蔽起來。運用這種方法,,可以不經(jīng)過分離干擾成分的操作而消除其干擾作用,,簡化分析步驟,因而在食品分析中應(yīng)用十分廣泛,,常用于金屬元素的測定,。
4、色層分離法
色層分離法又稱色譜分離法,,是一種在載體上進行物質(zhì)分離的方法的總稱,。根據(jù)分離原理的不同,可分為吸附色譜分離,、分配色譜分離和離子交換色譜分離等,。此類方法分離效果好,,近年來在食品分析中應(yīng)用得越來越廣泛。色層分離不僅分離效果好,,而且分離過程往往也就是鑒定的過程,。本法常用于有機物質(zhì)的分析測定,。
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