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氣相毛細(xì)柱操作不當(dāng)易造成固定相損傷
固定相損傷往往會(huì)造成對(duì)極性溶質(zhì)柱活性的增加、柱效的下降和柱流失加重等后果,。其癥狀為由于柱活性的增加,,造成出現(xiàn)脫尾峰和峰高強(qiáng)度降低;由于柱效和分辨率的下降,,出現(xiàn)峰變寬和由于過量的柱流失造成基線漂移,。如果固定相損傷比較嚴(yán)重,那么柱活性升高,、柱效下降和過量柱流失會(huì)同時(shí)發(fā)生,。
常見的操作錯(cuò)誤可導(dǎo)致固定相損傷
首先,超出固定想使用溫度上限加熱或沒有充分的載氣流下加溫都會(huì)損害柱子性能。其次,,在升溫過程中,,固定相意外與氧接觸會(huì)導(dǎo)致固定相降解。這就需要在升溫前,,要充分用載氣將柱內(nèi)氧趕盡,。后,污染的溶質(zhì)或樣品也可以損傷固定相,。不過,,所有這些問題都是可以預(yù)防的。在某些情況,,損傷的柱子也可以廢物利用,。色譜工作者可以很容易預(yù)防固定相熱損傷。如果發(fā)生固定相熱損傷,,有時(shí)也可以通過將柱子與檢測(cè)器斷開,,在恒溫上限用充足載氣流過夜吹洗。在重新安裝柱子之前,,將柱子末端切掉幾厘米以去除外來物質(zhì),。這些外來物是在重新固化時(shí)沉積在柱子上的。
當(dāng)柱子出現(xiàn)問題時(shí),,首先要弄清楚是柱污染還是柱固定相損傷,。當(dāng)不希望的物質(zhì)吸附到固定相上時(shí),就產(chǎn)生了污染,。當(dāng)在固定相內(nèi)發(fā)生一種化學(xué)反應(yīng)時(shí),,則出現(xiàn)了固定相損傷。換句話說,,化學(xué)損傷改變了固定相的組成,,而污染并不改變固定相的化學(xué)性質(zhì),而替代的是沉積物吸附到固定相上,。
在高溫情況下與氧接觸的損傷是一種典型的化學(xué)損傷,。對(duì)延長固定相壽命來說,預(yù)防氧化損傷是十分重要的,。在高溫條件下,,氧化損傷特別嚴(yán)重。采用高純度載氣和維持一種無泄漏系統(tǒng),,從而使柱子小限度避免接觸氧是一種有效方式,。即使采用高純度載氣,也需要捕集器使氧不能進(jìn)入色譜儀內(nèi),。
隔膜也是一個(gè)常見的忽略問題,,進(jìn)樣口橡膠隔膜經(jīng)常變化,,是因?yàn)榉磸?fù)使用后容易泄漏。泄漏的隔膜常常是氧進(jìn)入色譜儀內(nèi)的來源,。遺憾的是對(duì)氧化損傷的色譜柱沒有任何補(bǔ)救措施,。因?yàn)檫@種損傷是不可逆的,試圖在它損傷后用化學(xué)處理法來恢復(fù)柱子的惰性也是不可信的,。
來自活性樣品或活性溶質(zhì)的化學(xué)攻擊是固定相損傷的另一來源,。通常,固定相化學(xué)損傷的癥狀是峰脫尾,、吸附,、柱效下降和選擇性喪失。如果通過注射樣品造成污染,,那么損傷通常發(fā)生在柱子的前端,。載氣污染是化學(xué)損傷一個(gè)不常見的來源,它通常造成整個(gè)柱子的損傷,。固定相往往易受到強(qiáng)無機(jī)酸,,如鹽酸和強(qiáng)堿,如氫氧化鉀的化學(xué)攻擊,。通過注射或柱子沖洗方式來避免強(qiáng)酸或強(qiáng)堿的倒入,。有時(shí)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿是不可避免的,因?yàn)樗鼈兘?jīng)常是水相中有機(jī)樣品制備的副產(chǎn)物,。如果固定相的化學(xué)損傷僅局限在柱子的前端,,可以通過修整柱子前端的污染段,問題容易得到解決,。不過,,定位于柱子前端的化學(xué)損傷現(xiàn)象是十分少見的,經(jīng)常遇到的是整個(gè)柱子的固定相均為化學(xué)損傷,。