解乏、補充營養(yǎng),、改善睡眠......對它的檢測很關(guān)鍵,！
前言
色氨酸（Tryptophan），又稱β-吲哚基丙氨酸,，是一種有機化合物,，化學式C11H11N2O2，是人體的必需氨基酸之一,。色氨酸是植物體內(nèi)生長素生物合成重要的前體物質(zhì),，其結(jié)構(gòu)與IAA相似，在高等植物中普遍存在,，也是人體中重要的神經(jīng)遞質(zhì)—5-羥色胺的前體,，可用于妊娠期婦女營養(yǎng)補充劑和乳幼兒的特殊奶粉，用于煙酸缺乏癥,，作為安神藥，可調(diào)節(jié)精神節(jié)律,，改善睡眠,，也是復(fù)方氨基酸大輸液的原料之一。
關(guān)鍵詞：液相色譜；熒光檢測器,；食品,；L-色氨酸；內(nèi)標法,。
1.實驗方法
1.1 儀器配置
表1高效液相色譜系統(tǒng)配置清單
1.2 測試條件
色譜柱：Nova Atom PC18, 4.6×150mm,，3μm；
柱溫：35℃,；
流速：0.8ml/min,；
流動相：A/B=甲醇/0.01mol/L乙酸銨；
進樣量：10μL,；
表2 流動相梯度洗脫表
1.3 試劑及實驗材料
甲醇：色譜純,，
乙酸：色譜純，
乙酸銨：色譜純,，
無水氫氧化鋰:電子級,；
鹽酸：優(yōu)級純；
標準物質(zhì)：L-色氨酸（CAS號：73-22-3）,；
內(nèi)標物：1-甲基-D-色氨酸（CAS號：110117-83-4）,；分析天平；
超聲脫氣裝置,；
濾膜：0.45μm,，0.22μm。
1.4 標樣制備
1.4.1 L-色氨酸標準儲備液（1.00mg/mL）
準確稱取25mg(精確至0.0001g）L-色氨酸標準品,，于25mL容量瓶中,，用超純水溶解并定容至刻度，搖勻,，配制成質(zhì)量濃度為1.00mg/mL的標準溶液,。轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器中，于4℃冰箱中保存,。保存期6個月,。
1.4.2 L-色氨酸標準中間液(100μg/mL)
吸取L-色氨酸標準儲備液 1.00mL 于 10mL 容量瓶中,用水定容至刻度,混勻。轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器中,于4℃冰箱中保存,保存期6個月,。
1.4.3 內(nèi)標工作液(1 mg/mL)
稱取 10 mg(精確至 0.001g)1-甲基-D-色氨酸標準品于10 mL,容量瓶中,用水溶解后定容至刻度,混勻,。轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器中,于4 ℃冰箱中保存,保存期6個月。
1.4.4 L-色氨酸標準系列工作液
分別移取L-色氨酸標準中間液 2.0μL,、10μL,、50μ L、100μL,、200μL,、500μL于1mL容量瓶中,各加入 100μL內(nèi)標工作液,加水定容至刻度,混勻。L-色氨酸標準系列工作液的質(zhì)量濃度分別為0.20μg/mL、1.00μg/mL,、5.00μg/mL,、10.0μg/mL、20.0μg/mL,、50.0μg/mL,。臨用現(xiàn)配。
2 結(jié)果與討論
2.1 單標定性
取L-色氨酸標準使用液10.0μg/mL和內(nèi)標使用液100 μg/mL按照1.2測試條件分別進樣,，記錄進樣時間和譜圖（圖1-2）,。
圖1 L-色氨酸（10.0μg/mL）單標譜圖
圖2 內(nèi)標（100μg/mL）單標譜圖
單標譜圖數(shù)據(jù)
說明：由圖可知目標峰附近無雜質(zhì)干擾。理論塔板數(shù)為9577,，符合實驗要求,。
2.2 標準曲線
L-色氨酸標準系列工作液的質(zhì)量濃度分別為0.20μg/mL、1.00μg/mL,、5.00μg/mL,、10.0μg/mL、20.0μg/mL,、50.0μg/mL,，按照1.2的測試條件進樣分析，以濃度為橫坐標,，峰面積為縱坐標,，采用內(nèi)標法建立工作曲線。結(jié)果如圖3所示,。
圖3 L-色氨酸校準曲線線性圖
說明：由數(shù)據(jù)可得,，L-色氨酸在0.2-50.0μg/mL濃度范圍內(nèi)曲線方程為y=0.75435*x+0.00231，R平方值≥0.9999,，具有良好線性符合實驗要求,。
2.3 重復(fù)性試驗
取濃度10.0μg/mL 的L-色氨酸，內(nèi)標濃度100μg/mL的標準工作液,，按照1.2的測試條件分別連續(xù)進樣測定7次,，重復(fù)性色譜圖如圖5所示。
圖4 L-色氨酸標準品(10.0μg/mL )重復(fù)性疊加譜圖(n=7)
譜圖數(shù)據(jù)
說明：由數(shù)據(jù)可得,，濃度（10.0μg/mL）的L-色氨酸和濃度100μg/mL的1-甲基-D-色氨酸保留時間重復(fù)性小于0.15%,，峰面積重復(fù)性小于0.55%，測試重復(fù)性良好,，說明皖儀LC3200系列高效液相色譜儀具有良好的精密度,。
2.4 檢出限實驗
取濃度0.20μg/mL 的L-色氨酸，內(nèi)標濃度100μg/mL的標準工作液,，按照1.2的測試條件進樣測定,，記錄譜圖如圖4,。
圖5 0.20μg/mL 的L-色氨酸譜圖
說明：由數(shù)據(jù)可得，L-色氨酸的儀器檢出限為0.002μg/mL,，定量限為0.007 μg/mL。符合實驗要求,。
2.5 樣品實驗
準確稱取試樣 0.2 g(精確到 0.001g)于 10ml,螺紋帶蓋的聚四氟乙烯水解管中,依次加人 0.5 ml 內(nèi)標品溶液,、5.0ml氫氧化鋰溶液,渦旋混勻后超聲溶解,于 110 ℃恒溫箱中水解 20h。取出水解管,冷卻至室溫,用3mol/L鹽酸調(diào)pH至6-8,用水將樣品轉(zhuǎn)移并定容至 50mL,容量瓶中,，混勻,，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾,濾液供液相色譜測定。
空白樣品譜圖如圖6,，樣品譜圖如圖7
圖6 某奶粉空白樣品譜圖
圖7 樣品譜圖
譜圖數(shù)據(jù)
說明：由數(shù)據(jù)以及標準中的公式計算,，樣品含量為2650mg/100g。
2.6 注意事項
1.配制流動相0.01mol/L乙酸銨時需先調(diào)節(jié)pH,，再定容,。
2.內(nèi)標物質(zhì)用水溶解較慢，可用超聲加速溶解,。
3 結(jié)論
本文使用皖儀LC3200系列高效液相色譜儀對標準品L-色氨酸進行了檢測,，實驗結(jié)果表明L-色氨酸在濃度在0.2-50.0μg/mL濃度范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)大于0.9999,，L-色氨酸連續(xù)進樣7次的保留時間重復(fù)性小于0.2%,，峰面積重復(fù)性小于0.6%，測試重復(fù)性良好,。儀器檢出限為0.002μg/mL,，定量限為0.007μg/mL。該方法準確可靠,、靈敏度高,，可用于嬰幼兒配方食品、特殊醫(yī)學用途配方食品和嬰幼兒谷類輔助食品中色氨酸的測定,。
7
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)