皖儀科技液相色譜測(cè)定藥品中有效成分含量
返魂草為我國(guó)長(zhǎng)白山地區(qū)的特色資源之一,，收載于中國(guó)藥典2020年版第四部“成方制劑中本版藥典未收載的藥材和飲片"，為菊科千里光屬植物的干燥全草,，包括全葉千里光和麻葉千里光 ,具有清熱化痰,、鎮(zhèn)咳平喘功效 ,其主要活性成分是以綠原酸為代表的有機(jī)酸類(lèi)和以金絲桃苷為代表的黃酮類(lèi)。祛風(fēng)止痛膠囊是由老鸛草,、槲寄生,、續(xù)斷等藥材組成的中藥復(fù)方制劑，該藥具有祛風(fēng)鎮(zhèn)痛、舒筋活血,、強(qiáng)壯筋骨的功效,用于四肢麻木,、腰膝疼痛、風(fēng)寒濕痹等癥,。處方中續(xù)斷具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨,、續(xù)折傷,、止崩漏、安胎等功效,其有效成分為川續(xù)斷皂苷Ⅵ,。
本文采用高效液相色譜法分別對(duì)返魂草中綠原酸,、金絲桃苷含量以及祛風(fēng)止痛丸中續(xù)斷的有效成分川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量進(jìn)行測(cè)定,均取得滿意效果。
1 實(shí)驗(yàn)方法
1.1 儀器配置
表1. 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單
1.2 試劑及實(shí)驗(yàn)材料
1.2.1 返魂草
乙腈：色譜純,；
甲醇：色譜純,；
綠原酸（標(biāo)準(zhǔn)品）：(100μg/mL in Methanol)；
金絲桃苷（標(biāo)準(zhǔn)品）：(98.0%),；
一次性注射器（0.5-2mL）,；
微孔濾膜（0.45μm）；
1.2.2 祛風(fēng)止痛丸
乙腈：色譜純,；
甲醇：色譜純,；
正丁醇：分析純；
氨水：優(yōu)級(jí)純,；
川續(xù)斷皂苷Ⅵ（標(biāo)準(zhǔn)品）：(98.0%）,；
1.3 測(cè)試條件
1.3.1 返魂草
色譜柱：C18 5μm, 4.6×250mm；
柱溫：35℃,；
流速：1mL/min,；
檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm；
進(jìn)樣方式及進(jìn)樣量：自動(dòng)部分10μL進(jìn)樣,；
流動(dòng)相：A：乙腈 B：0.2%甲醇溶液,；
表2. 返魂草流動(dòng)相梯度洗脫條件
1.3.2 祛風(fēng)止痛丸
色譜柱：C18 5μm, 4.6×250mm；
柱溫：35℃,；
流速：1mL/min,；
檢測(cè)波長(zhǎng)：212nm；
進(jìn)樣方式及進(jìn)樣量：自動(dòng)部分10μL進(jìn)樣,；
流動(dòng)相：乙腈-水=30:70,；
1.4 溶液配制
1.4.1 返魂草
1.4.1.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液
①精確量取標(biāo)準(zhǔn)品綠原酸（100μg/mL）600μl，加甲醇制成每1mL含綠原酸60μg的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,。
②精密稱(chēng)定標(biāo)準(zhǔn)品金絲桃苷（98.0%）0.0042g,，用甲醇定容至100mL容量瓶中制成40μg/mL的金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,。
1.4.1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液
分別量取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各500uL,，混勻,，即可配制成每1mL含綠原酸30μg、金絲桃苷20μg的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,。
1.4.1.3 供試品溶液
取本品粉末（過(guò)四號(hào)篩）0.2506g,，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中,，精密加入70%甲醇溶液20mL,密塞,，稱(chēng)定重量，超聲處理（250W,，頻率40KHz）60分鐘,，放冷，再稱(chēng)定重量,，用70%甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量,，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò),，取續(xù)濾液,，即得。
1.4.2 祛風(fēng)止痛丸
1.4.2.1 水飽和的正丁醇
在分液漏斗里面倒入適量的水和正丁醇,，振搖提取數(shù)分鐘，放置分層后,，先將下層的水（水的密度較正丁醇大）從漏斗中緩慢放出,，余下者即為水飽和正丁醇。
1.4.2.2 氨試液
取濃氨溶液60mL,，加水使成150mL,，即得。
1.4.2.3 正丁醇飽和的水
在水中加入足量的正丁醇,，混合均勻,，然后靜置分層，取水使用,。
1.4.2.4 標(biāo)準(zhǔn)品溶液
取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品0.0052g,，精密稱(chēng)定，置于25mL容量瓶中,，加甲醇稀釋至刻度,，搖勻，即制成每1mL含0.2mg的溶液,。
1.4.2.5 供試品溶液
取祛風(fēng)止痛丸適量,，研細(xì),，取1.9998g，精密稱(chēng)定,，置具塞錐形瓶中,，精密加入甲醇50mL,密塞，稱(chēng)定重量,，超聲處理（250W,，頻率50KHz）30分鐘，放冷,，再稱(chēng)定重量,，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻,，過(guò)濾,，精密量取續(xù)濾液25mL，蒸干,，殘?jiān)铀?span>25mL使溶解,，用水飽和的正丁醇振搖提取3次（50mL，30mL,30mL）,，合并正丁醇提取液,，用氨試液100mL洗滌，再用正丁醇飽和的水100mL洗滌,，取正丁醇液,，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25mL用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò),，取續(xù)濾液,，即得。
2 結(jié)果與討論
2.1 綠原酸,、金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)
圖1. 綠原酸,、金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
表3. 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)
表4. 金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)
2.2返魂草樣品檢測(cè)
圖2 返魂草色譜圖
表5. 返魂草綠原酸色譜參數(shù)
表6. 返魂草金絲桃苷色譜參數(shù)
說(shuō)明：據(jù)返魂草色譜圖可見(jiàn)樣品綠原酸、金絲桃苷分離效果,、重復(fù)性較好,，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算返魂草中含綠原酸（C16H18O9）為0.25%，含金絲桃苷（C21H20O12）為0.127%,。
2.3川續(xù)斷皂苷Ⅵ標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)
圖3. 川續(xù)斷皂苷Ⅵ標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
表7. 川續(xù)斷皂苷Ⅵ標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)2.4祛風(fēng)止痛丸樣品檢測(cè)
圖4. 祛風(fēng)止痛丸色譜圖
表8. 祛風(fēng)止痛丸色譜參數(shù)
說(shuō)明：據(jù)色譜圖可見(jiàn)祛風(fēng)止痛丸樣品,、川續(xù)斷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)性較好，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算,，以川續(xù)斷皂苷Ⅵ（C47H76O18）計(jì),，祛風(fēng)止痛丸中每1g含續(xù)斷6.35mg。
3 結(jié)論
據(jù)吉林省中藥材標(biāo)準(zhǔn)DBY-22-JLYC-001-2017,，返魂草樣品含量測(cè)定按干燥品計(jì)算,，含綠原酸（C16H18O9）不得少于0.10%,，金絲桃苷（C21H20O12）不得少于0.050%。使用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器測(cè)得返魂草樣品中含綠原酸（C16H18O9）為0.25%,，含金絲桃苷（C21H20O12）為0.127%,，返魂草樣品中綠原酸（C16H18O9）的定性RSD（%）為0.355%，定量RSD（%）為0.491%,。樣品中金絲桃苷（C21H20O12）的定性RSD（%）為0.399%,，定量RSD（%）為0.403%，均符合標(biāo)準(zhǔn),。
據(jù)《中國(guó)藥典》,，祛風(fēng)止痛丸樣品含量測(cè)定按每1g含續(xù)斷以川續(xù)斷皂苷VI（C47H76O18）計(jì)，不得少于4.30mg,。使用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器測(cè)得祛風(fēng)止痛丸樣品中以川續(xù)斷皂苷Ⅵ（C47H76O18）計(jì)每1g含續(xù)斷6.35mg,，祛風(fēng)止痛丸樣品中川續(xù)斷皂苷VI（C47H76O18）的定性RSD（%）為0.331%，定量RSD（%）為0.663%,，符合標(biāo)準(zhǔn),。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器測(cè)定返魂草和祛風(fēng)止痛丸中有效成分含量,，分離效果和重復(fù)性較好,，能夠很好地滿足《中國(guó)藥典》和吉林省中藥材標(biāo)準(zhǔn)DBY-22-JLYC-001-2017的測(cè)試要求。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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