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PCR儀的溫度控制
閱讀：1351 發(fā)布時間：2022-6-14
對普通PCR儀來說,，溫度控制指標主要是指溫度的準確性,、均勻性,、以及升降溫速度，對梯度PCR儀來說,，除了溫度的準確性和均勻性,、升降溫速度以外，還必須考慮儀器在梯度模式和標準模式下是否具有同樣的溫度特性,。
溫度的準確性是指樣品孔溫度與設(shè)定溫度的一致性,，它直接關(guān)系到實驗的成敗。如果排除樣品加入過程中的問題,，對于PCR反應而言*重要的莫過于溫度控制的準確性,，由于PCR是一個幾何級數(shù)擴增的過程，擴增過程中退火溫度的細微變化會被放大而直接影響結(jié)果，不論是變性,、退火還是延伸都需要準確控制溫度,，對退火溫度而言溫控顯的尤為重要，有時1度甚至0.5度的差異也能決定實驗的成功與失敗,，所謂差之毫厘,，謬之千里。因而對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量,。
溫度的均勻性是指樣品孔間的溫度差異,，它關(guān)系到在不同樣品孔進行反應結(jié)果的一致性。我們在實驗中發(fā)現(xiàn)有時用同樣的樣品,，同樣的PCR反應程序,，*后的結(jié)果竟然差異非常明顯，或許就是因為不同位置的溫度不均一性所致,。一些使用過早期PCR儀的腦子格外靈光的研究人員偏愛使用PCR儀中間某幾個固定的孔,，就是因為過往反復的教訓和認真的思索得出了這樣的結(jié)論，PCR儀的溫度均勻性不好,，特別是*外周的樣品孔情況更差,，很有可能影響實驗結(jié)果——即“位置的邊緣效應”會影響結(jié)果的可重復性。正是這種位置效應對定量PCR的結(jié)果的影響更為明顯,，所以后來才有Roche和Cobbett的離心式定量PCR的重大**。