單細(xì)胞內(nèi)熒光信號定量識別分析

來自德國的高通量單細(xì)胞形變測量分析系統(tǒng)

該系統(tǒng)是一套基于微流控流體壓力梯度的,、在倒置顯微鏡的擴(kuò)展起來的,、集成流式細(xì)胞儀特性、熒光檢測模塊,、溫控模 塊,、高速成像和數(shù)據(jù)采集分析軟件的高通量單細(xì)胞實時形變測量和單細(xì)胞力學(xué)性質(zhì)分析系統(tǒng)。是一種以流式細(xì)胞儀的速度檢測單個細(xì)胞形態(tài)和力學(xué)性質(zhì)的技術(shù),，每個細(xì)胞都被實時拍攝,、分析和成像存儲。 此外,，非破壞性的力量應(yīng)用于細(xì)胞,，提供一種方便，穩(wěn)健和高通量的技術(shù)進(jìn)行生物標(biāo)志物的檢測,，可用于基礎(chǔ)科學(xué)和臨床研究,。

探索細(xì)胞的物理特性作為生物標(biāo)志物,可以將非破壞性的力量應(yīng)用于細(xì)胞或珠子，并觀察它們的變形,。 這允許研究對物理壓力的特定機(jī)械響應(yīng),。

勢亮點：

• 機(jī)械力學(xué)作為一種新的生物標(biāo)志物--溫和無損傷

• 無標(biāo)記

• 非破壞性的力量

• 高速測量單個細(xì)胞的實時形變（高度、寬度,、面積,、比例）、高度偏差,、環(huán)度衡量比,、孔度、亮度,、楊氏模量等

• 細(xì)胞機(jī)械特性測量高通量（1000細(xì)胞/秒）

• 配有高速成像,、熒光檢測、溫控模塊

• 不需要細(xì)胞分離/純化

• 文獻(xiàn)量大,、級別高文章達(dá)數(shù)十篇

實時形變

成像

每個細(xì)胞被同時拍照,、分析和儲存,。 這允許通過它們的光學(xué)特性來找到小亞群或區(qū)分細(xì)胞,。 另外可以研究像表面拓?fù)浠蚣?xì)胞對光的衰減的形態(tài)特性,。

• 每個獲取圖像的存儲

• 快速訪問細(xì)胞大小和形態(tài)

流式細(xì)胞技術(shù)

細(xì)胞通過微流通道時,提取細(xì)胞變形、亮度和大小等參數(shù),，同時,。 這允許實時地研究細(xì)胞屬性。

• 可溫控和熒光檢測

  實時變形細(xì)胞計數(shù)和同時熒光檢測：




•  熒光模塊使得該系統(tǒng)不再只是附加了一個額外的細(xì)胞力學(xué)檢測通道的流式細(xì)胞儀,。它成為了生命科學(xué)實驗室的得力工具 - 提供了更多視角來解決科學(xué)問題,。在生物學(xué)研究中通常使用熒光流式細(xì)胞儀來鑒定和定量細(xì)胞和細(xì)胞過程。使該系統(tǒng)集熒光流式細(xì)胞儀和實時變形的點于一身,，形成了實時熒光形變細(xì)胞儀,。光片激發(fā)設(shè)計可實現(xiàn)三通道1D熒光成像。除了所有實時變形參數(shù)外,，系統(tǒng)還會分析熒光信號實時得到峰圖,，速度可達(dá)每秒1000個細(xì)胞。也可在實驗后處理保存的原始熒光數(shù)據(jù),，以針對特定的問題和需 求修改處理方法,。

• 1)根據(jù)表面marker鑒定血細(xì)胞：

  熒光模塊可檢測和鑒定同一樣品中的三種不同熒光。利用標(biāo)記的表面熒光蛋白可同時實現(xiàn)細(xì)胞鑒定和力學(xué)性質(zhì)及形態(tài)性質(zhì)測量,。 下圖為 G-CSF動員的外周血樣品細(xì)胞群體,。 標(biāo)記后的細(xì)胞表面markers CD3-FITC (T-cells)， CD34-PE (造血干細(xì)胞)和CD14-APC(單核細(xì)胞)熒光強(qiáng)度檢測 揭示了各細(xì)胞類型所具有的不同力學(xué)性質(zhì),。

  
  

• 2)一維熒光成像：

  熒光模塊在激發(fā)光路徑中產(chǎn)生一束受限光片,，穿過流道，細(xì)胞會經(jīng)過一束很窄的激發(fā)光幕,。這樣可以進(jìn)行1D熒光成像,，例如可用于解析沿流動方向的熒光標(biāo)記結(jié)構(gòu)的側(cè)向分布。檢測到的熒光峰值帶有很多重要信息,。熒光標(biāo)記的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)（如細(xì)胞核）會顯示窄峰,，而胞質(zhì)會顯示出更寬的峰,。不同分裂期細(xì)胞中標(biāo)記的組蛋白也會呈現(xiàn)出不同的峰圖.

  
  

• 
  加熱模塊 - 溫度控制

  加熱模塊實現(xiàn)了生理溫度下的測量。加熱模塊帶有一個300 W的加熱器和幾個靜默通風(fēng)機(jī)來有效混合熱空氣,?？拷鼧悠诽幱幸粋€傳感器和一個控制單元，用以j確地將溫度控制在所需值,。系統(tǒng)的空氣循環(huán)系統(tǒng)非常高效,，當(dāng)進(jìn)行開放操作（如更換樣品）后可以迅速恢復(fù)溫度。

  
  高速攝像

  該成像模塊是款高速明場攝像顯微鏡,使用同步化微秒高強(qiáng)度LED光源減輕運動模糊,可進(jìn)行j慢運動攝影.每秒可記錄500幅幀圖像或10000幀小區(qū)域圖像

  
  

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