一種在發(fā)生細(xì)胞凋亡時量化細(xì)胞凋亡的非侵入性方法

新的 Lamin Chromobody Immunodetection Vector 是細(xì)胞凋亡高內(nèi)涵分析 (HCA) 的一項(xiàng)重大突破，因?yàn)槠渌治?/span>

依賴于靜態(tài)終點(diǎn)分析,。核層是包裹整個細(xì)胞核并支撐核膜的支架,。它的功能是將核內(nèi)容結(jié)合在一起并為核增加機(jī)械支持。

核層有助于保持結(jié)構(gòu)剛性和形態(tài)變化之間的平衡,。因此,，人工摻入過表達(dá)和熒光標(biāo)記的核纖

層蛋白通常會導(dǎo)致不希望的細(xì)胞毒性副作用。新的 Lamin Chromobody 克服了這種不需要的副作用,。

Lamin Chromobody 的小尺寸產(chǎn)生了高信噪比,，用于令人驚嘆的高分辨率圖像或核層動力學(xué)的延時電影。值得注意的

是,，它對細(xì)胞功能沒有影響,，并且對大多數(shù)細(xì)胞類型表現(xiàn)出極低的毒性。只需使用 Lamin Chromobody 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染您選

擇的細(xì)胞系,。該質(zhì)粒包含與 TagGFP2 (Evrogen) 融合的 Lamin 特異性羊駝抗體序列,。轉(zhuǎn)化后，您的細(xì)胞將表達(dá) Lamin 

Chromobody,。細(xì)胞核的外圍將發(fā)出強(qiáng)烈的環(huán)狀形式的熒光,，因?yàn)闊晒馍w分子特異性地定位于椎板表面。這種瞬時結(jié)合

不會影響細(xì)胞活力或核相關(guān)過程,，從而為您提供了一種*的可能性,，可以在活細(xì)胞顯微鏡檢查期間監(jiān)測核完整性和形態(tài)

，作為細(xì)胞健康和活力的指標(biāo),。您還可以將 Lamin Chromobody 用作生物傳感器,，用于實(shí)時檢測有絲分裂或細(xì)胞凋亡。

有絲分裂細(xì)胞的共聚焦活細(xì)胞成像

HeLa（左）和 U2OS（右）細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)融合到 TagGFP2 的 Lamin Chromobody,。經(jīng)歷有絲分裂的細(xì)胞顯示出典型

的邊緣狀結(jié)構(gòu)（G 期）,、核層解聚（前中期）和有絲分裂結(jié)束時的重組（末期）。

用 Lamin-Chromobody 進(jìn)行細(xì)胞凋亡測定

使用融合到 TagGFP2 的 Lamin Chromobody Lamin Chromobody 對未經(jīng)處理的細(xì)胞（左）和添加 5 µM 星形孢菌素 (STS)（右）進(jìn)行延時成像,。請注意在用 STS 處理細(xì)胞后在細(xì)胞凋亡過程中觀察到的特征性“爆炸"片段,。

通過自動圖像采集和計(jì)算模式識別進(jìn)行定量評估。以 15 分鐘的間隔監(jiān)測椎板的形態(tài)變化（如用 Lamin Chromo

body 檢測的）,，如碎裂和囊泡形成,。顯示了在 20 小時內(nèi)用濃度增加的 STS (0-5 µM) 處理后凋亡細(xì)胞的百分比。

染色體將你的細(xì)胞變成免疫報(bào)告工廠

納米抗體是*的小抗體片段,，可與靶蛋白非常有效地結(jié)合,。在動物細(xì)胞中表達(dá)的納米抗體可以被收集并用于體外

研究。當(dāng)納米抗體被表達(dá)為與 GFP 等報(bào)告分子的融合體時,，發(fā)生了一些意想不到的事情,。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)結(jié)合。此外,，使用正確的載體和啟動子,，結(jié)合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質(zhì)融合提供了一個非常好的替代方案,，用于免疫定位研究,。為什么？因?yàn)?GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變?nèi)诤系鞍椎幕钚?。相比之下?/span>

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動物家族（駱駝,、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體,。這些重鏈抗體通過單個可變結(jié)構(gòu)域識別并結(jié)合其抗原,。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2x3 nm) 非常小,、天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa),。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn),。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的溫度下極為穩(wěn)定,，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用,。他們將打開您的研究可能性,。