一種追蹤活細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)的非侵入性方法
用于檢測活細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白的新工具 Actin Chromobody 可讓您實(shí)時(shí)監(jiān)測細(xì)胞骨架或細(xì)胞核的組裝或拆卸。Chromobody 的小尺寸為令人驚嘆的高分辨率圖像或細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)的延時(shí)電影產(chǎn)生高信噪比,。令人驚訝的是，它對肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)沒有影響,，并且對大多數(shù)細(xì)胞類型表現(xiàn)出極低的毒性,。只需使用 Actin Chromobody 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染您選擇的細(xì)胞系。該質(zhì)粒包含與 TagRFP 或 TagGFP (Evrogen) 融合的肌動(dòng)蛋白特異性羊駝抗體序列,。轉(zhuǎn)化后,，您的細(xì)胞將表達(dá)肌動(dòng)蛋白染色體,。當(dāng)熒光 Chromobody 分子特異性定位于肌動(dòng)蛋白時(shí)，細(xì)胞的細(xì)胞骨架或細(xì)胞核就會亮起,。瞬時(shí)結(jié)合不會影響細(xì)胞活力或運(yùn)動(dòng)性,，因此為您提供了觀察細(xì)胞中細(xì)胞骨架或細(xì)胞核的*可能性。使用 Actin-Chromobody 靶向和追蹤您感興趣的細(xì)胞系中的微絲,，或作為細(xì)胞形態(tài)的標(biāo)記物,，或作為細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的探針。

使用 Actin Chromobody 實(shí)時(shí)可視化肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)
Actin Chromobody 揭示了活細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué),。在用 2 µM Cytochalasin D 處理 1 小時(shí)并恢復(fù) 2 小時(shí)后,，使用共聚焦顯微鏡對 HeLa 細(xì)胞進(jìn)行成像。延時(shí)分析顯示肌動(dòng)蛋白重組,。

Actin Chromobody 突出顯示各種細(xì)胞系中的微絲,。顯示的是用與 TagRFP 或 TagGFP 融合的肌動(dòng)蛋白 Chromobody 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的熒光圖像。

用核肌動(dòng)蛋白染色體（TagGFP2,，綠色）和核纖層蛋白染色體（TagRFP2,，紅色）轉(zhuǎn)染的 NIH 3T3 細(xì)胞（鼠成纖維細(xì)胞）在無血清培養(yǎng)基中饑餓 24 小時(shí)。用血清刺激后 30 秒顯示了核肌動(dòng)蛋白-染色體探測的內(nèi)源性 F-肌動(dòng)蛋白組裝和分布,。

核肌動(dòng)蛋白-Chromobody 質(zhì)粒已由德國馬爾堡大學(xué) BPC 藥理學(xué)研究所的 Robert Grosse 教授在 ChromoTek 的許可下發(fā)表和描述：

Matthias Plessner,、Michael Melak、Pilar Chinchilla,、Christian Baarlink,、Robert Grosse (2015)。細(xì)胞擴(kuò)散后核 F-肌動(dòng)蛋白的形成和重組J Biol Chem,。

染色體將你的細(xì)胞變成免疫報(bào)告工廠

納米抗體是*的小抗體片段,，可與靶蛋白非常有效地結(jié)合。在動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的納米抗體可以被收集并用于體外研究,。當(dāng)納米抗體被表達(dá)為與 GFP 等報(bào)告分子的融合體時(shí),，發(fā)生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)結(jié)合,。此外,，使用正確的載體和啟動(dòng)子，結(jié)合具有高特異性和低背景,。這為 GFP 與感興趣的蛋白質(zhì)融合提供了一個(gè)

非常好的替代方案,，用于免疫定位研究。為什么,？因?yàn)?GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變?nèi)诤系鞍椎幕钚浴?/span>相比之下,，

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動(dòng)物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒有輕鏈的功能性抗體,，即所謂的“重鏈"抗體,。這些重鏈抗體通過單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域識別并結(jié)合其抗原,。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時(shí)，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2x3 nm) 非常小,、天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa),。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn),。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的溫度下極為穩(wěn)定,，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用,。他們將打開您的研究可能性,。