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極速揭秘 | 10分鐘內(nèi)完成UV-Vis熱解鏈實驗
寡核苷酸的熱解鏈實驗是一項重要的確認測試，用于分析雙鏈結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性,，也是 PCR 反應(yīng)退火溫度的重要參考依據(jù)。
該實驗可以通過紫外可見分光光度計實現(xiàn),。通常的測試方法為測定核酸類藥物在 260nm 處的吸光度值隨溫度變化的曲線,。隨著溫度的升高，雙鏈結(jié)構(gòu)逐漸打開,，260nm 處的吸光度值逐漸升高,，直至打開成單鏈后吸光度值保持穩(wěn)定，當雙鏈結(jié)構(gòu)失去一半時所對應(yīng)的溫度定義為解鏈溫度（Tm 值）,。
在此實驗中,，最重要的是要控制溫度的變化，傳統(tǒng)的紫外分光光度計需要使用復(fù)雜的附件來控制溫度,，例如,，水控溫系統(tǒng)需要插額外的管線并進行換水和清潔的工作。同時,，測試耗時長,，至少需要 1 個小時以上才能完成。
借助 Cary3500 UV-Vis 紫外可見分光光度計可在 10 分鐘內(nèi)完成解鏈溫度的分析,。
Cary3500 UV-Vis 紫外可見分光光度計采用帕爾貼風冷控溫系統(tǒng)，升溫降溫全程電子控溫,，無需額外管線,。搭配溫度探頭觸達溶液，精準實現(xiàn)溶液內(nèi)的溫度控制,，同時,，攪拌子可使每個樣品的溫度保持均勻，這樣就可以設(shè)置更快的升溫速率,，縮短分析時間,，且不會降低數(shù)據(jù)質(zhì)量。
Cary3500 UV-Vis 最快可設(shè)置 40℃/min 的升溫速率，經(jīng)過驗證,，不同的升溫速率下得到的 Tm 值的波動小于 0.4℃,。
圖 1. 鯡魚精子 DNA 吸光度與溫度 (A) 和相應(yīng)的一階導(dǎo)數(shù) (B) 作為升溫速率的函數(shù)
另外，Cary3500UV-Vis 多池控溫的選項,，可以以快速升溫實現(xiàn) 4 個樣品的同時測試和慢速升溫實現(xiàn) 7 個樣品的同時測試,。
下面，我們通過視頻來查看下 Cary3500 是如何實現(xiàn)熱解鏈溫度的測試的,。
當然,，Cary3500UV-Vis 的操作軟件也可以與 Agilent OpenLab 軟件集成。OpenLab 提供技術(shù)控制來安全地獲取,、處理報告和存儲數(shù)據(jù),。對于必須遵循 FDA 21 CFR Part 11，歐盟附錄 11,，GAMP5 以及 ISO/IEC 17025 和 EPA 40 CFR Part 160 合規(guī)指南的實驗室來說,，這些控制是不可少的。