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推“柱”之薦｜配方顆粒色譜柱推薦之淡竹葉
在前幾期,，我們重點(diǎn)為大家介紹并推薦了適用于中草藥檢測(cè)的各類(lèi)安捷倫色譜柱，以便大家在日后的檢測(cè)工作中匹配使用,。本期繼續(xù)帶來(lái)適用于淡竹葉配方顆粒檢測(cè)的色譜柱推薦,，跟上我們，精彩繼續(xù),！
Agilent 在 2003 年首家推出了亞 2 微米粒徑的色譜柱,，由此掀開(kāi)了超高效液相色譜分離（UHPLC）的序幕。ZORBAX 系列的 UHPLC 色譜柱中,，分為快速高通量分離（RRHT）和超高壓快速高分離度（RRHD）兩個(gè)系列,，高壓力耐受分別為 600bar 和 1200bar。ZORBAX Plus C18 和 SB C18 RRHD 是中藥配方顆粒中常用 UHPLC 色譜柱,。本實(shí)驗(yàn)選用的色譜柱 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD,，其固定相表面通過(guò)致密鍵合和雙封端處理，對(duì)中藥中生物堿,、皂苷,、黃酮、萜類(lèi)等成分具有優(yōu)異的峰形和分離度,。
根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局 《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中淡竹葉配方顆粒的檢測(cè)項(xiàng)目,，對(duì)其特征譜圖和含量測(cè)定都采用 UHPLC 方法。特征譜圖測(cè)定中要求理論板數(shù)按異葒草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 10000,，供試品呈現(xiàn)的特征峰保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品相對(duì)應(yīng),。含量測(cè)定中規(guī)定了理論板數(shù)按異葒草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 10000。本文采用 1290 Infinity II 超高效液相色譜儀以及 ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD, 2.1x100mm, 1.8μm 色譜柱對(duì)淡竹葉配方顆粒的特征譜圖進(jìn)行了分析,，并對(duì)淡竹葉配方顆粒中異葒草苷的含量進(jìn)行了測(cè)定,。此外，我們也對(duì)該方法進(jìn)行了加速,，能夠?qū)崿F(xiàn)更快速的分析,。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1. 淡竹葉配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照譜圖與替代方法中供試品特征譜圖(包括標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法)的比較 （峰 2(S):異葒草苷；峰 3:日當(dāng)藥黃素）
色譜條件：
標(biāo)準(zhǔn)方法：
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流動(dòng)相：A：乙腈,；B：H2O（0.2%磷酸）
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梯度：0-4 min,，95 %-92%B；4-25 min,，92%B-85%B,；25-30min,，85-25 %B；后運(yùn)行,，7min
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流速：0.25ml/min
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柱溫：40 °C
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檢測(cè)波長(zhǎng)：350 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率：20Hz
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進(jìn)樣量：1 μL
加速方法：
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梯度：24 min,，95 %-92%B；2-12.5 min,，92%B-85%B,；12.5-15min，85-25 %B,；后運(yùn)行,，3.5min
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流速：0.5ml/min
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其余同上。
系統(tǒng)適用性結(jié)果見(jiàn)下表：
結(jié)果
1）使用 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱,，能準(zhǔn)確定位標(biāo)準(zhǔn)中要求的 4 個(gè)特征峰,，且相對(duì)保留時(shí)間（RRT）在標(biāo)準(zhǔn)要求范圍內(nèi)。
2）標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法的理論板數(shù)按京異葒草苷峰計(jì)算分別為 124514 和 94893,，大于規(guī)定值 10000，結(jié)果符合要求,。
3） 使用加速方法加速分析后,，分析結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)要求，且分析時(shí)間縮短至原來(lái)的 50%,。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖2. 淡竹葉配方顆粒供試品含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法譜圖對(duì)照
色譜條件：
同特征圖譜標(biāo)準(zhǔn)方法和加速方法,。
系統(tǒng)適用性結(jié)果見(jiàn)下表：
結(jié)果
1）使用該方法測(cè)定異葒草苷的含量，其理論板數(shù)符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,。
2）通過(guò)提高一倍流速,，可加速分析方法，提高檢測(cè)效率(50% 時(shí)間節(jié)省),。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)選用 ZORBAX Eclipse Plus C18 色譜柱對(duì)淡竹葉配方顆粒特征譜圖及含量進(jìn)行了檢測(cè),，均符合標(biāo)準(zhǔn)要求。原方法流速較低（0.25ml/min）,，分析時(shí)間較長(zhǎng),。通過(guò)提升流速，分析效率提高 1 倍,，且相對(duì)保留時(shí)間,、系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果*要求。
儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦
1290 Infinity II 四元 UHPLC 系統(tǒng)：全能泵(G7104A),，自動(dòng)進(jìn)樣器(G7129B)，柱溫箱(G7116B),，DAD(G7117A)
其它詳細(xì)操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集,，或聯(lián)系 Agilent。