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披沙煉金 | 配方顆粒色譜柱推薦之金錢(qián)草檢測(cè)
在之前的文章中,，我們主要為大家梳理并推薦了適用于各類(lèi)中藥配方顆粒檢測(cè)的安捷倫色譜柱,，并對(duì)廣金錢(qián)草提供推薦色譜柱和分析實(shí)例,。相信這滿(mǎn)滿(mǎn)的干貨,，一定讓大家意猶未盡,。那么本期就讓我們持續(xù)輸出,，為大家?guī)?lái)關(guān)于金錢(qián)草配方顆粒檢測(cè)的色譜柱推薦。趕緊跟上,，一起出發(fā)吧,！
安捷倫創(chuàng)新的色譜柱 InfinityLab Poroshell 120 采用 Agilent 專(zhuān)有的表面多孔型填料技術(shù), 其 1.9μm 色譜柱具有以下優(yōu)點(diǎn)：
柱效比 1.8μm 全多孔類(lèi)型的色譜柱更高,，具更高峰容量，適合復(fù)雜樣品分析,；
與市場(chǎng)上同類(lèi)產(chǎn)品比較,，具有更好的峰型；
高能耐 1300 bar 壓力,，具有較長(zhǎng)的柱壽命,，即使在接近極限的壓力下使用；
能和 Agilent 1290 Infinity 等超高效液相色譜完美匹配,，實(shí)現(xiàn)快速或高分離度分析,。
本實(shí)驗(yàn)選用的色譜柱 Poroshell 120 SB-C18, 2.1x100mm, 1.9μm 與原標(biāo)準(zhǔn)中 1.6μm 的色譜柱相比柱效相當(dāng)，但壓力相對(duì)降低,，有利于延長(zhǎng)色譜柱壽命和提高方法的耐用性,。
根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局 《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》中金錢(qián)草配方顆粒的檢測(cè)項(xiàng)目，對(duì)其特征譜圖和含量測(cè)定都采用高效液相色譜法,。特征譜圖測(cè)定中要求理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于 10000,，以及對(duì)供試品應(yīng)呈現(xiàn)的特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積做了規(guī)定。含量測(cè)定中規(guī)定了理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于 2500,。
1,、特征譜圖
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
圖 1. 金錢(qián)草配方顆粒供試品的特征譜圖與標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)照譜圖的比較 （峰2（S1）：山柰酚-3-O-（2,6-α-L-二吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷）；峰4：山柰酚-3-O-蕓香糖苷,；峰5（S2）：槲皮素,；峰6：山柰酚）
色譜條件：
流動(dòng)相：A：0.2%磷酸；B：乙腈
梯度：0-15min,，12%-15%B,；15-30min，15%-35%B,；30-30.1min,，35%-12%B；30.1-35min,，12%B
流速：0.2ml/min
柱溫：30°C
檢測(cè)波長(zhǎng)：364nm(4nm),Ref:off;采樣頻率：20Hz
進(jìn)樣量：1μL
系統(tǒng)適用性結(jié)果見(jiàn)下表：
結(jié)果
1）供試品色譜中呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的7個(gè)特征峰,，且相對(duì)保留時(shí)間都在規(guī)定范圍內(nèi)；
2）峰2,、峰4與S2峰的相對(duì)峰面積在規(guī)定范圍內(nèi),；
3）理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算為408280，遠(yuǎn)高于規(guī)定值10000,，符合標(biāo)準(zhǔn)要求,。
2、含量測(cè)定
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
圖 2. 金錢(qián)草配方顆粒供試品含量測(cè)定 HPLC 法和 UHPLC 法譜圖對(duì)照
色譜條件：
流動(dòng)相：A：0.4%磷酸水溶液，B：甲醇,；52%A/48%B(HPLC法),，55%A/45%B(UHPLC法)
流速：1ml/min(HPLC法)；0.5ml/min(UHPLC法)
柱溫：30°C
檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm(4nm),Ref:off;采樣頻率：2.5Hz(HPLC法),；20Hz(UHPLC法)
進(jìn)樣量：10μL(HPLC法),；1μL(UHPLC法)
系統(tǒng)適用性結(jié)果見(jiàn)下表：
結(jié)果：
1）主峰槲皮素和山柰酚峰型對(duì)稱(chēng)，分離度均符合含量測(cè)定要求,，理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算均符合標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定,；
2）方法從HPLC轉(zhuǎn)移到UHPLC，分析時(shí)間縮短至原來(lái)的1/5,，且UHPLC方法提高了槲皮素,山柰酚和樣品中雜峰的分離度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
本實(shí)驗(yàn)選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 和 ZORBAX SB-C18 色譜柱對(duì)金錢(qián)草配方顆粒特征譜圖及含量進(jìn)行了檢測(cè),，均符合標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)系統(tǒng)適用性的要求,。本方法可用于金錢(qián)草配方顆粒的分離和檢測(cè)，為該配方顆粒的質(zhì)量保證提供檢測(cè)依據(jù),。
儀器系統(tǒng)及色譜柱推薦
1290 四元 UHPLC 系統(tǒng): 全能泵(G7104A),，自動(dòng)進(jìn)樣器(G7167B)，柱溫箱(G7116B),，DAD(G7117B)
1260 四元 UHPLC 系統(tǒng): 四元泵(G7111B),，自動(dòng)進(jìn)樣器(G7129A)，柱溫箱(G7116A),，DAD(G7115A)
其它詳細(xì)操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集,，或聯(lián)系 Agilent。