高效液相色譜是檢測食品添加劑,、污染物,、真菌毒素等的主要檢測設(shè)備。提高液相色譜檢測水平,、快速準(zhǔn)確地完成檢測是液相色譜檢測工作者需要思考的基本問題,。本文通過剖析高效液相色譜法檢測經(jīng)常出現(xiàn)的問題，提出了檢測分析的技術(shù)要點和控制措施,，并對可疑的檢測結(jié)果進(jìn)行綜合分析,，以提高高效液相色譜檢測技術(shù)水平,，為從事高效液相色譜檢測工作的人員提供理論和實操參考。
1 高效液相色譜法檢測過程中存在的問題
液相色譜檢測是以色譜峰的保留時間來進(jìn)行定性分析,，同一物質(zhì)在同一色譜條件下應(yīng)有相同的保留時間,。但在實際食品添加劑檢測中經(jīng)常會遇到復(fù)雜基質(zhì)樣品，由于雜質(zhì)成分與待測化合物性質(zhì)相似或接近,，就可能在色譜行為上表現(xiàn)一致,，即使全按照檢測標(biāo)準(zhǔn)操作，也有各種因素干擾結(jié)果的準(zhǔn)確性,，對于這些峰,，僅靠保留時間定性，容易出現(xiàn)漏檢,、錯檢,、數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確和檢測時間長等問題。①漏檢是不能檢出該檢的組分,，特別是低含量和復(fù)雜的組分,，如黃曲霉毒素，毒性大,、含量低,，容易漏檢。②錯檢是對檢測結(jié)果的誤判,，得出錯誤結(jié)論,，俗稱“假陽性"。③數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確是檢測數(shù)據(jù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)偏離真值,，甚至忽高忽低,，不能真實反映出樣品內(nèi)組分情況。④檢測時間長是在檢測樣品多,、指標(biāo)多的情況下,，從樣品進(jìn)入預(yù)處理到出具檢測報告的時間長，甚至超過法定時限,。因此,，快速、準(zhǔn)確地應(yīng)用色譜分析來定性,、定量目標(biāo)物是檢測機(jī)構(gòu)獲取準(zhǔn)確,、可靠的分析數(shù)據(jù)的關(guān)鍵。
2 高效液相色譜法檢測技術(shù)的質(zhì)量控制
2.1 樣品前處理
前處理包括取樣,、制樣,、提取和凈化。正確的樣品前處理是保障檢測數(shù)據(jù)科學(xué),、準(zhǔn)確的第一步,。不正確,、不規(guī)范的預(yù)處理可能導(dǎo)致譜圖產(chǎn)生雜峰、詭峰,，影響目標(biāo)峰的分析,。嚴(yán)格控制預(yù)處理過程，盡力減少雜峰,，突出目標(biāo)物，避免在目標(biāo)物出峰位置有干擾峰,，造成假陽性的錯誤檢測結(jié)論,。
取樣要有代表性，嚴(yán)格按照規(guī)程進(jìn)行混勻,、縮分,。①根據(jù)樣品狀態(tài)來制樣。固體要將其粉碎后再混勻,；液體樣品制備前要搖勻,；結(jié)晶樣品溶解后攪拌均勻，如有結(jié)晶析出的蜂蜜樣品,，需將樣品的瓶蓋旋緊后置于水浴(溫度不超過60 ℃)中溫?zé)?，待蜂蜜樣品全部溶化后攪勻、冷卻,，再稱取樣品,，從而保證樣品性質(zhì)的一致性。②根據(jù)檢測項目的不同來制樣,，如堅果炒貨食品,，檢測污染物時需去殼處理，檢測添加劑時則需帶殼處理,。
2.2 選擇合適的檢測方法
樣品的特性千差萬別,，選擇準(zhǔn)確的檢測方法是保障結(jié)果準(zhǔn)確的必要手段，這就需要結(jié)合產(chǎn)品特性,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求選擇合規(guī),、合理的檢測方法。此外,，應(yīng)及時關(guān)注最新出臺的標(biāo)準(zhǔn),，若有變更，則需按照變更后的檢測標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行環(huán)境,、人員,、設(shè)備和方法的驗證，確認(rèn)具備實驗?zāi)芰?，再按照變更的檢測方法進(jìn)行檢測,。
2.3 對儀器,、試劑進(jìn)行有效控制
2.3.1 對儀器的控制
為了保證儀器設(shè)備的日常使用和維護(hù)，檢驗室應(yīng)制定儀器的管理人員,，并明確職責(zé),。儀器的操作者必須通過培訓(xùn)、考核后上崗,，熟知儀器的工作性能,、操作規(guī)程和安全指標(biāo)。檢測儀器必須進(jìn)行計量檢定,，檢定合格后,，方能進(jìn)行檢測工作。通常要求在兩次檢定周期內(nèi)至少開展1次期間核查,，針對使用頻率較高的儀器,，儀器使用人員應(yīng)增加核查頻次，監(jiān)測儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,，把控正常損耗對儀器檢測結(jié)果的影響,。此外，做好儀器的日常維護(hù),，完成相關(guān)記錄,。
2.3.2 對試劑的控制
實驗室要有試劑管理規(guī)程，并按要求分類儲存,，如避光,、冷藏、有毒有害和易燃易爆等要有相應(yīng)的儲存地點,，并明示標(biāo)簽,。對于在使用或保管中的標(biāo)準(zhǔn)品需進(jìn)行期間核查，通過質(zhì)量控制保證標(biāo)準(zhǔn)品量值的準(zhǔn)確可靠以及可溯源性,。
2.4 優(yōu)化檢測環(huán)境
檢測環(huán)境條件對液相色譜檢測的準(zhǔn)確性有重要影響,，如環(huán)境溫度的不穩(wěn)定會影響流動相的黏度，導(dǎo)致保留時間發(fā)生變化,，影響檢測結(jié)果的重現(xiàn)性,。因此，做好日常監(jiān)測和記錄,，保證檢測環(huán)境符合檢測需求,。同時，保持檢測環(huán)境的整潔,，避免樣品間的交叉污染,，有助于提高檢測效率。
2.5 提高檢測人員的操作水平
檢測員在檢測過程中應(yīng)嚴(yán)格按照法律法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，整個實驗過程都要保持科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度,，做到過程有記錄,、結(jié)果可追溯。檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)制定人員培訓(xùn)計劃,，持續(xù)有效的培訓(xùn)有助于提升檢測人員的檢測水平,。此外，實驗室應(yīng)多組織檢測員參加外部的能力驗證和內(nèi)部的質(zhì)量控制考核,，通過盲樣考核,、比對實驗、加標(biāo)回收和留樣復(fù)測等手段確保檢測員具備相應(yīng)的檢測能力,。
2.6 檢測儀器的維護(hù)與保養(yǎng)
科學(xué)的維護(hù)和保養(yǎng)可延長高效液相色譜儀的使用壽命,、提高其運行效率。①嚴(yán)格按照要求規(guī)范開關(guān)機(jī),，開機(jī)完畢后、開始檢測前要進(jìn)行全面檢查,，保證設(shè)備處于良好狀態(tài),，不會對檢測產(chǎn)生不良影響。關(guān)機(jī)時切忌亂丟亂放,，以免在下次使用時出現(xiàn)誤差,，影響檢測結(jié)果。②注意維護(hù)實驗室環(huán)境,，不能僅在工作時保證適宜的溫度和濕度,，即使不工作時也要關(guān)注實驗室的溫度和濕度變化，以免造成設(shè)備故障或檢測數(shù)據(jù)不穩(wěn)定,。
3 可疑結(jié)果的綜合分析
高效液相色譜檢測結(jié)果往往會出現(xiàn)數(shù)值不準(zhǔn)確,、錯檢(假陽性)等情況，嚴(yán)格,、規(guī)范地進(jìn)行預(yù)處理是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確的基礎(chǔ),。遇到可疑樣品時，應(yīng)考慮制樣是否完備,，標(biāo)準(zhǔn)是否正確執(zhí)行,，前處理過程是否準(zhǔn)確，判定是否合理,。排除這些因素后,，進(jìn)行可疑樣品復(fù)測，可采取以下手段進(jìn)一步確認(rèn),。
3.1 調(diào)整色譜條件
有的樣品比較復(fù)雜,，會出現(xiàn)雜質(zhì)峰，干擾結(jié)果判定,，可通過調(diào)整流動相比例,，消除雜質(zhì)峰的影響,，準(zhǔn)確地進(jìn)行定性分析。例如,，在檢測肉制品中的防腐劑時,，按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》(GB 5009.28—2016)的要求,，流動相為甲醇+乙酸銨,，比例為5∶95，曾出現(xiàn)雜質(zhì)峰影響苯甲酸的定性,，將流動相甲醇+乙酸銨的比例調(diào)整為10∶90,，雜質(zhì)峰偏離苯甲酸出峰位置，有效避免了苯甲酸的錯檢,。
3.2 加標(biāo)實驗
在樣品前處理時添加標(biāo)準(zhǔn)品,，對比保留時間、色譜峰,、色譜峰面積的變化,，對可疑檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行有效分辨。例如,，在豆干樣品初測時檢出苯甲酸,，根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2760—2014)，豆干中不允許添加苯甲酸,，因此需進(jìn)行樣品復(fù)測,。通過重新制備樣，加標(biāo)復(fù)測后,，苯甲酸標(biāo)液峰和干擾峰分離,，判定初測為假陽性。
3.3 使用二極管陣列檢測器檢測
通過保留時間和光譜信息圖進(jìn)行綜合定性,。當(dāng)保留時間附近有可疑色譜峰出現(xiàn)時,，比較標(biāo)準(zhǔn)溶液光譜圖與樣品處理液光譜圖的重合性，能夠進(jìn)一步確證可疑色譜峰是否是目標(biāo)待測物,。例如,，按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》(GB 5009.28—2016)中的第一法——液相色譜法,，采用二極管陣列檢測器對樣品中的苯甲酸進(jìn)行測定,，分別采集色譜圖和光譜圖，將樣品處理液與標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖進(jìn)行比較,，以保留時間定性,，若有檢出，則結(jié)合樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液光譜圖，從峰起點,、峰頂點和峰落點再次確認(rèn),。若樣品光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液的光譜圖全不重合，可確證樣品的檢出結(jié)果為假陽性,；若光譜圖全重合,，可確證樣品為陽性檢出。因此,，結(jié)合保留時間和光譜圖進(jìn)行綜合分析判定,，可有效保證樣品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
3.4 液質(zhì)聯(lián)用
由于受價格和耗材的限制,，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜設(shè)備沒有得到廣泛應(yīng)用,，但它的優(yōu)勢非常突出。它既能利用高效液相色譜對復(fù)雜化合物的分離能力,，又綜合了高分辨率質(zhì)譜對化合物的準(zhǔn)確定性和定量,，能夠同時測定多種化合物，且分析結(jié)果的靈敏性和準(zhǔn)確性都能得到保障,。童蘭艷等采用高效液相色譜-質(zhì)譜法同時測定食品中的9種甜味劑(甜蜜素,、安賽蜜、糖精鈉,、阿斯巴甜,、阿力甜,、三氯蔗糖,、甜菊糖苷、愛德萬甜和紐甜),，與國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法相比,，分離效果好、靈敏度高,，明顯提高了檢測效率,。
4 結(jié)語
食品檢測面臨著新要求、新挑戰(zhàn),、新形勢,，高效液相色譜技術(shù)憑借其準(zhǔn)確性高、靈敏度好,、分辨率高的優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥殘留,、食品添加劑、非法添加物,、霉菌毒素,、氨基酸和糖類檢測中，但因其操作要求高，未能廣泛普及,，如很多市,、縣檢測機(jī)構(gòu)的高效液相色譜儀被閑置，沒能發(fā)揮出其應(yīng)有的作用,。
隨著科學(xué)技術(shù)水平的提高,，不管是國家檢測機(jī)構(gòu)還是第三方檢測機(jī)構(gòu)，都在不斷完善儀器檢測管理制度,。在實際操作中正確運用高效液相色譜法的技術(shù)要點,，使儀器的功能和特點更大限度地被發(fā)揮和利用，才能提高高效液相色譜技術(shù)的使用率和準(zhǔn)確率,，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,，更好地監(jiān)管食品安全，做到讓老百姓吃得放心,。
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