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看圖例了解二手液質(zhì)聯(lián)用儀檢測流程

閱讀:1756      發(fā)布時間:2022-6-15
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如今蛋白組/代謝組學(xué)被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域,,液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(液質(zhì)聯(lián)用)是蛋白組/代謝組學(xué)研究的主要手段,因此液質(zhì)聯(lián)用受到了醫(yī)學(xué)科學(xué)們非常大的重視,。


液質(zhì)聯(lián)用儀是將液相色譜儀與質(zhì)譜儀聯(lián)用的儀器,用于樣品定性定量分析,。其特點(diǎn)是將應(yīng)用范圍非常廣的液相色譜分離方法與靈敏,、專屬、能提供分子量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法結(jié)合起來的一種現(xiàn)代分析技術(shù),。


二手液質(zhì)聯(lián)用儀技術(shù)原理:


樣品通過液相色譜分離后的各個組分依次進(jìn)入質(zhì)譜檢測器,,各組分在離子源被離子化,產(chǎn)生帶有一定電荷,、質(zhì)量數(shù)不同的離子,。不同離子在電磁場中的運(yùn)動行為不同,采用質(zhì)量分析器按不同質(zhì)荷比(m/z)把離子分開,,得到依質(zhì)荷比順序排列的質(zhì)譜圖,。通過對質(zhì)譜圖的分析處理,可以得到樣品的定性和定量結(jié)果,。


液相色譜分析的一般流程圖解

液相色譜分析的一般流程圖解


液相色譜部分由進(jìn)樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)三個部分組成


(1)進(jìn)樣裝置要求密封性好,,死體積小,,重復(fù)性好,中心進(jìn)樣,,進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力,、流量影響小。


(2)輸液系統(tǒng)主要的是梯度洗脫裝置——有兩種方式:一種稱低壓梯度,,指常壓下溶劑按一定比例混合后再由高壓泵輸入色譜柱,,又稱外梯度;另一種稱高壓梯度,,指先用高壓泵將各溶劑輸入混合器混合,,再送入色譜柱,也稱為內(nèi)梯度,。


(3)分離系統(tǒng)包括色譜柱,、連接管和恒溫器等,。與單純LC相比,LC-MS一般流速較低(高流速可能影響霧化效果),,所以一般用窄徑柱,,即2 mm或2.1mm的,粒徑一般為3.5μm,,也有1.7μm的,。


質(zhì)譜的電離與質(zhì)量分析流程圖解

質(zhì)譜的電離與質(zhì)量分析流程圖解


(1)ESI電離:其工作原理是將液滴變成蒸汽,產(chǎn)生離子發(fā)射的過程中形成的溶劑由液相泵輸送到ESI Probe,,經(jīng)其內(nèi)的不銹鋼毛細(xì)管流出,,這時給毛細(xì)管加2-4 kv的高壓,由于高壓和霧化氣的作用,,流動相從毛細(xì)管頂端流出時,,會形成扇狀噴霧,使液滴生成含樣品和溶劑離子的氣溶膠,。ESI屬于zui軟的電離方式,,通常只產(chǎn)生分子離子峰。適合熱不穩(wěn)定的極性分子,,能分析小分子及大分子,。


(2)四極桿質(zhì)量分析器:四極桿內(nèi)所包圍的空間存在雙曲線形電場。從離子源入射的加速離子穿過四極桿中的電場會受到電場作用,,只有選定的m/z離子以限定的頻率穩(wěn)定的通過四極桿質(zhì)量分析器,,其他離子則碰到極桿上被吸濾掉,不能通過,,即達(dá)到“濾質(zhì)"的作用,。四極桿質(zhì)量分析器結(jié)構(gòu)緊湊,體積小,,掃描速度快,,適用于LC-MS聯(lián)用儀。


二手液質(zhì)聯(lián)用儀檢測流程總結(jié)


所謂液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn),,就是通過液相色譜把要分析的混合物分離開,,再用質(zhì)譜對某個或某些分子進(jìn)行定性或定量。它的強(qiáng)大功能使之不僅能輕松面對單個分子的研究,,更加適合針對于復(fù)雜樣本的“組學(xué)"分析,。由于蛋白質(zhì)和小分子性質(zhì)的差異,面向蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)的液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)也有所區(qū)別,,我們將在后續(xù)的篇幅中介紹液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)在各類學(xué)研究中的應(yīng)用,,敬請期待。

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