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新品上市丨博奧森人外周血淋巴細(xì)胞分離液,,一步離心 高效提取
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品名稱 | Lymphocyte Separation Medium (Human) |
產(chǎn)品貨號(hào) | CS102 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 200ml |
200ml×20 |
產(chǎn)品優(yōu)勢
1.凈:無菌,,無支原體,低內(nèi)毒素,,再也不用擔(dān)心細(xì)胞污染啦,;
2.簡:即用型,,步驟簡單,用時(shí)少,,一步離心,,淋巴細(xì)胞輕松get;
3.晰:分離條帶清晰,,“白膜層"明顯,,手殘黨使用也能so easy;
4.高:分離的淋巴細(xì)胞活力好,,利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,;
5.純:分離的淋巴細(xì)胞純度大于90%,紅細(xì)胞,、粒細(xì)胞等雜細(xì)胞少,,沒有分散的細(xì)胞團(tuán)塊,減少雜質(zhì)干擾,,使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確,;
6.廣:可以用來分離人的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞,外周血,、骨髓,、臍帶血等多種血液樣本全覆蓋;
老師,,Ficoll分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的原理是什么啊,?
外周血單個(gè)核細(xì)胞 (Peripheral blood mononuclear cell,,PBMC)是外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞,、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞,,其中淋巴細(xì)胞占70%-80%,單核細(xì)胞占10-30%,,樹突狀細(xì)胞占1-2%,。
Ficoll根據(jù)血細(xì)胞的密度差異,通過離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,,從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來,。單個(gè)核細(xì)胞的體積、形狀和比重與其他細(xì)胞不同,,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞比重較大,,為1.092左右,,淋巴細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重為1.075左右。
原來是這樣,,那用Ficoll進(jìn)行人外周血中淋巴細(xì)胞分離時(shí),,各層分布的細(xì)胞我也不太明白,可以講解一下嘛,?
很簡單,,記住下面這張圖就可以了,在利用Ficoll作密度梯度離心時(shí),,各種血液成分將按密度梯度重新分布聚集:血漿和血小板密度較低,,懸浮于分離液的上部;紅細(xì)胞與粒細(xì)胞密度較大,,沉于分離液的底部,;PBMC 密度稍低于分離液,,位于分離液界面之上,。因此從管底往上依次為:紅細(xì)胞-Ficoll細(xì)胞分離液-淋巴細(xì)胞-血漿。一般要先小心地將上層的血漿和血小板移除后再吸取淋巴細(xì)胞,。
這么看就清晰多啦,,可是我的離心結(jié)果中出現(xiàn)了血小板污染,,這是為什么呢?
很多情況都可以導(dǎo)致血小板污染,,可以從以下幾個(gè)方面對(duì)實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行優(yōu)化:
1.血液樣本最好為新鮮抗凝血(采血2 h以內(nèi)),;
2.離心溫度控制在18~20℃;
3.取目的層樣品時(shí),,需先將上層溶液去掉,,再吸取目的層;
4.分離后進(jìn)行洗滌時(shí),,可以在較低的離心力情況下進(jìn)行離心處理,,血小板密度比較低,會(huì)留在血漿中,,PBMC在沉淀里,,通過這一操作可以除掉一部分血小板;
5.吸取過多的血漿層也可能會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染,。
我明白了,,那紅細(xì)胞污染又是什么原因呢?
出現(xiàn)紅細(xì)胞污染的原因比較簡單,,可能是由于以下幾個(gè)問題:
1.溫度太低,。低溫使Ficoll密度變大,從而導(dǎo)致紅細(xì)胞粒細(xì)胞在最底層聚集效果不佳,,進(jìn)入上邊的PBMC層,;
2.離心速度太慢,、離心時(shí)間太短,各層分布的細(xì)胞沒有得到沉淀,,應(yīng)該根據(jù)結(jié)果摸索更適宜的離心條件,。
老師你在分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞的時(shí)候還有什么經(jīng)驗(yàn),快把秘訣分享給我,!
那我可得好好和你聊聊了,!
1.分離結(jié)果為何出現(xiàn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)量低、活力低且出現(xiàn)其它類型細(xì)胞污染的情況,?
可能是由于溫度過高,,使Ficoll密度變小,PBMC進(jìn)入分離液層,,回收的PBMC數(shù)量減少,。也可能是由于血液樣本放置過長,或是血液樣本保存和運(yùn)輸途中條件不當(dāng)?shù)仍颉?/span>
2.分離結(jié)果為何出現(xiàn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)量低但活力正常的情況,?
在分離時(shí),,未用全血及組織稀釋液或者PBS將血液稀釋到1:1,通常情況下,,紅細(xì)胞比容較高,,高細(xì)胞密度會(huì)導(dǎo)致大量的淋巴細(xì)胞陷入聚集的紅細(xì)胞團(tuán)塊中,此時(shí)應(yīng)進(jìn)一步稀釋血液樣品,,提高單核細(xì)胞產(chǎn)量并減小紅細(xì)胞團(tuán)塊的體積,。
3.分離結(jié)果為何出現(xiàn)淋巴細(xì)胞低產(chǎn)量且粒細(xì)胞污染增加的情況?
可能是由于離心機(jī)轉(zhuǎn)子振動(dòng),,導(dǎo)致淋巴細(xì)胞帶的增寬,,與下層細(xì)胞混合。應(yīng)先檢查轉(zhuǎn)子是否已平衡,,再選擇合適的轉(zhuǎn)速,,以避免自發(fā)共振頻率。
謝謝老師,,秘訣我都記好啦,那你有沒有什么產(chǎn)品推薦呢,?
當(dāng)然啦,,Bioss全新推出的人外周血淋巴細(xì)胞分離液,是一種無菌,、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液,,能夠有效分離人外周血淋巴細(xì)胞,并且保證分離的淋巴細(xì)胞活率,,無菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測,。 有了它你的細(xì)胞分離一定可以事半功倍,!