培養(yǎng)基滅菌是否完整,影響因素很多,,除了培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量,,滅菌溫度的高低,時間長短外,,還取決于:
1.營養(yǎng)成分的保持
濕熱滅菌時,,微生物被殺死的同時,培養(yǎng)基
的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞,,特別是氨基酸和維生素,。如在121℃,僅20min,,就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞,,蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng),,造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化,,因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。
2.微生物的耐熱性
細(xì)菌芽孢的熱阻較大,,滅菌所需要的時間取決于把細(xì)菌芽孢減少到所規(guī)定數(shù)目的時間,。
3.pH值
pH值對微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時,,微生物最不易死亡,。pH<6.0時,微生物比較容易死亡,,此時H+很容易滲入微生物的細(xì)胞,,從而改變細(xì)胞的生理反應(yīng),促使其死亡,。所以培養(yǎng)基的pH越低,,所需的時間也越短。
4.培養(yǎng)基成分
油脂,、糖類及蛋白質(zhì)等組成的高濃度有機物會包于細(xì)胞的周圍形式一層薄膜,、影響熱的傳導(dǎo)。而高濃度的鹽類,、色素則削弱其耐熱性,,滅菌較易。例如:大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡,在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡,,在30%糖液中需30分鐘才死亡,。一般糖類含量較多的時候最好選用115℃,30分鐘,;一般的培養(yǎng)基可選擇121℃,,20分鐘。
5.泡沫
泡沫中的空氣形成隔熱層,,使熱量難以滲透進去,,殺死其中的雜菌。
6.顆粒
顆粒小,,容易滅菌,,顆粒大,則難滅菌,。對于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養(yǎng)基,,可用粗濾的方法(不應(yīng)影響培養(yǎng)基質(zhì)量)予以除去,培養(yǎng)基結(jié)塊會造成培養(yǎng)基滅菌的不完整,。
7.培養(yǎng)基滅菌鍋內(nèi)空氣是否排凈
這個是影響滅菌是溫度和壓力比例關(guān)系的要點,,同樣達到了相同的壓力的情況下,如果空氣未能排凈,,也就是說不是純蒸汽滅菌,,此時的溫度不一定能達到目的要求,會嚴(yán)重影響滅菌效果,。