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清楚這些內(nèi)容,，使用cck8檢測試劑盒不再是難題！
cck8檢測試劑盒為MTT 法的替代方法,，是一種基于WST（水溶性四唑鹽,，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒?？捎糜谒幬锖Y選,、細胞增殖測定、細胞毒性測定,、腫瘤藥敏等試驗。
使用說明：
一,、制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量時 （測定細胞具體數(shù)量時）
1,、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞,。
2,、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,，每組 3-6 個復(fù)孔,。
3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁,，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值,，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線,。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。）
二,、細胞活性檢測
1,、在 96 孔板中接種細胞懸液（100?L/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在 37℃,5% CO2 的條件下）,。
2,、向每孔加入 10?L CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。
3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時,。
4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度,。
5,、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話,，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化,。
三,、細胞增值-毒性檢測
1、在 96 孔板中配置 100 µL的細胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時（在 37 ℃,，5% CO2 的條件下）。
2,、向培養(yǎng)板加入 10 µL不同濃度的待測物質(zhì),。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12,、24 或 48 小時）,。
3、向每孔加入 10 µLCCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）,。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響,。
4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
5,、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度,。
6、cck8檢測試劑盒如果暫時不測定 OD 值,，打算以后測定的話,，可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化,。