1,、配方的選定

　　同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,，加以比較核對(duì),，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用,，記錄其來(lái)源,。

　　2、的制備記錄

　　每次制備均應(yīng)有記錄,，包括名稱,，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號(hào),，最終pH值,、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份,，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂,。

　　3,、成分的稱取

　　培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂,，最好一次完成，不要中斷,?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號(hào),，并將所需稱取的藥品一次取齊,，置于左側(cè)，每種稱取完畢后,，即移放于右側(cè),。*稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查,。

　　4,、各成份的混合和溶化

　　培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的,。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng),。最好使用不銹鋼鍋加熱溶化,，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí),、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng),、以防焦化，如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象,、該培養(yǎng)基即不能使用,，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,，再用較小火力使所有成分*溶化,，直至煮沸。如為瓊脂溶化,，用另一部分水溶化其它成分,，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中,，因蒸發(fā)而丟失的水分,，最后必須加以補(bǔ)足。

　　5,、pH的初步調(diào)正

　　因培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中,、pH會(huì)有所變化，各成分*溶解后,，應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正,。例如,，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高,。因此,，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn),、以期能掌握最終pH,，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)整后,，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。

　　6,、過(guò)濾澄清

　　液體培養(yǎng)基必須絕對(duì)澄清,，瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無(wú)顯著沉淀，因此,，須要采用過(guò)濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求,。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形,，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂,。

　　瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過(guò)濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過(guò)濾,。新制肉,、肝、血和土豆等浸液時(shí),、則須先用絨布將碎渣濾去,，再用濾紙反復(fù)過(guò)濾。如過(guò)濾法不能達(dá)到澄清要求,、則須用蛋清澄清法,。即將冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶?jī)?nèi)，裝入量不得超過(guò)燒瓶容量的1/2,，每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個(gè)雞蛋的蛋白,，強(qiáng)力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中,、121°C加熱20分鐘,、取出趁熱以絨布過(guò)濾即可。

　　7,、分裝

　　應(yīng)按使用的目的和要求,，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi),。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3,。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,，其外還須用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時(shí)最好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器,。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí),，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,，以利于*滅菌,。每批應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批同時(shí)滅菌,，以為測(cè)定該批培養(yǎng)基最終pH之用,。

　　8、滅菌

　　一般培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法,。在各種培養(yǎng)基制備方法中,，如無(wú)特殊規(guī)定，即可用此法滅菌,。

　　某些畏熱成分,，如糖類，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液,，以過(guò)濾或間歇滅菌法消毒,，以后再用無(wú)菌操作技術(shù),、定量加于培養(yǎng)基,。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液,、體液和抗生素等則應(yīng)以無(wú)菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50°C左右的培養(yǎng)基中,。

　　瓊脂斜面應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時(shí),，擺置成適當(dāng)斜面,，待其自然凝固。

　　9,、質(zhì)量測(cè)試

　　制備好以后,，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂,、水分浸入,、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等,、均應(yīng)挑出棄去,。并測(cè)定其最終pH。

　　將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過(guò)夜,，如發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng),，即棄去,。

　　用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時(shí),，如無(wú)菌生長(zhǎng)或生長(zhǎng)不好,。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前,，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去,，不能使用。

　　10,、保存

　　應(yīng)存放于冷暗處,，最好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時(shí)間不宜超過(guò)一周,，傾注的平板不宜超過(guò)3天,。每批產(chǎn)品均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明顯標(biāo)簽。