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蛋白的3種提取方法
1.單層貼壁細(xì)胞總蛋白的提取
倒掉培養(yǎng)液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養(yǎng)液（或?qū)⑵恐绷⒎胖靡粫?huì)兒使殘余培養(yǎng)液流到瓶底然后再用移液器將其吸走）,。
每瓶細(xì)胞加3ml 4℃預(yù)冷的PBS（0.01M pH=7.2～7.3）,。平放輕輕搖動(dòng)1min洗滌細(xì)胞，然后棄去洗液,。重復(fù)以上操作兩次,，共洗細(xì)胞三次以洗去培養(yǎng)液。將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置于冰上,。
按1ml裂解液加10μl PMSF（100mM）,，搖勻置于冰上。（PMSF要搖勻至無(wú)結(jié)晶時(shí)才可與裂解液混合。）
每瓶細(xì)胞加400μl含PMSF的裂解液,，于冰上裂解30min,，為使細(xì)胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經(jīng)常來(lái)回?fù)u動(dòng)。
裂解完后,，用干凈的刮棒將細(xì)胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(cè)（動(dòng)作要快）,，然后用槍將細(xì)胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。（整個(gè)操作盡量在冰上進(jìn)行,。）
于4℃下12000 rpm離心5min,。（提前開離心機(jī)預(yù)冷）將離心后的上清分裝轉(zhuǎn)移倒0.5min的離心管中放于-20℃保存。
2.組織中總蛋白的提取
將少量組織塊置于1～2ml勻漿器中球狀部位,，用干凈的剪刀將組織塊盡量剪碎,。
加400μl單去污劑裂解液裂（含PMSF）于勻漿器中，進(jìn)行勻漿,。然后置于冰上,。
幾分鐘后再碾一會(huì)兒再置于冰上，要重復(fù)碾幾次使組織盡量碾碎,。
裂解30min后,，即可用移液器將裂解液移至1.5ml離心管中，然后在4℃下12000 rpm離心5min,，取上清分裝于0.5ml離心管中并置于-20℃保存,。
加藥物處理的貼壁細(xì)胞總蛋白的提取由于受藥物的影響，一些細(xì)胞脫落下來(lái),，所以除按1）操作外還應(yīng)收集培養(yǎng)液中的細(xì)胞,。
3.培養(yǎng)液中細(xì)胞總蛋白的提取
將培養(yǎng)液倒至15ml離心管中，于2500 rpm離心5min,。
棄上清,，加入4ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500 rpm離心5min,。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次,。
用槍洗干上清后，加100μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30min,，裂解過(guò)程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解,。
將裂解液與培養(yǎng)瓶中裂解液混在一起4℃、12000 rpm離心5min,，取上清分裝于0.5ml離心管中并置于-20℃保存,。