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你不得不收藏的抗體偶聯(lián)物選擇指南
免疫學(xué)實驗已經(jīng)成為蛋白質(zhì)科學(xué)研究領(lǐng)域難以替代的重要實驗方法。通過將“可以與待測分子結(jié)合的特異性抗體”和“易于被檢測到的標(biāo)記物”二者相偶聯(lián)的方法,，研究人員已經(jīng)獲得了高效且特異檢測樣本中靶標(biāo)的有效工具,。而且隨著檢測手段的更新迭代,，越來越多的標(biāo)記物類型也花樣翻新,，大有“亂花漸欲迷人眼”之勢。那么,，如何才能在種類繁多的抗體偶聯(lián)物中找到合適自己的那一個呢,？今天就讓我們?yōu)槟銚荛_迷霧，一探究竟。
其實,，作為標(biāo)記的偶聯(lián)物種類雖多,，但其實The commonly used偶聯(lián)物只有3個大類，即：酶標(biāo)記,、熒光標(biāo)記和生物素標(biāo)記,。
HRP標(biāo)記往往是樣本單靶點檢測的The preferred,，但當(dāng)需要對同一樣本中的多個靶點進(jìn)行多通道檢測時，熒光標(biāo)記抗體則提供了一種更好的選擇,。各類熒光標(biāo)記,，如：AF系列、Cy系列,、FITC,、羅丹明等為研究人員們提供了極大地選擇空間，因此被廣泛應(yīng)用于免疫熒光染色 (IF), 流式細(xì)胞術(shù) (FC), 和熒光免疫印跡 (FWB)實驗中,。選擇熒光標(biāo)記時,，熒光相對強度和光譜分離度的選擇尤為重要。由于激光光源,、檢測設(shè)備等的不同,，不同的熒光標(biāo)記在不同的設(shè)備上具有不同的熒光強度。因此,，選擇熒光標(biāo)記物時,，需要結(jié)合實驗室設(shè)備的特點和蛋白豐度，以確保最亮的標(biāo)記物和表達(dá)水平The minimum的蛋白相互組合,。此外,，“串光”問題會在熒光實驗中帶來非常大的不利影響,，并直接影響結(jié)果的可信度。因此,，熒光標(biāo)記物發(fā)射光譜應(yīng)盡可能地彼此遠(yuǎn)離,，以避免鄰近通道間熒光信號的串?dāng)_。如果難以確認(rèn)最佳熒光標(biāo)記的種類,，優(yōu)先去嘗試AF488, Cy5, FITC, PE等文獻(xiàn)中The commonly used到的熒光標(biāo)記通常是較為穩(wěn)妥的選擇,。
好的開始是成功的一半,，辛苦實驗的你不需要為選擇標(biāo)記抗體而苦惱,。給博奧森一份信任，我們還你的不只是一支好抗體,！