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BD  PAXgene全血RNA采集管產(chǎn)品詳細信息

PAXgene血液RNA系統(tǒng)由PAXgene血液RNA管(可從BD,，貓。不,。762165)用于血液采集,、穩(wěn)定和運輸，PAXgene血液RNA試劑盒用于硅膠膜RNA分離和自旋柱格式的純化,。凈化可以手工進行,，使用微量離心機，或在QIAcube自動進行,。ce - ivd標(biāo)記管和試劑盒提供精確的性能規(guī)格,，確保高度可靠的RNA純化。

性能

PAXgene血液RNA管的目的是收集的全血和穩(wěn)定細胞內(nèi)RNA長達3天的年齡在18歲至25歲之間°C(見圖“RNA穩(wěn)定°C:年齡在18歲至25歲之間的安全系數(shù)"和“RNA穩(wěn)定°C:年齡在18歲至25歲之間IL1B")或5天2 - 8°C(見圖“RNA穩(wěn)定在2 - 8°C:安全系數(shù)"和“RNA穩(wěn)定在2 - 8°C: IL1B"),。目前可用的數(shù)據(jù)顯示,，細胞RNA在-20°C或-70°C下至少可以穩(wěn)定96個月。

使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA純度高,，A260/A280值在1.8 - 2.2之間,，≤1.0% (w/w)基因組DNA。當(dāng)使用高達30%的洗脫液時,，至少95%的樣品在RT-PCR中沒有顯示抑制作用,。

平均樣品制備時間(基于12個樣品制備的數(shù)據(jù))約為90分鐘，只有40分鐘的動手時間,。在處理過的樣本中,，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產(chǎn)量≥3µg。由于產(chǎn)量高度依賴于捐助者，個別產(chǎn)量可能有所不同,。個人捐贈者,PAXgene血液RNA系統(tǒng)提供高度可再生的和可重復(fù)的收益率(見圖“可再生的和可重復(fù)的RNA凈化"和“重復(fù)性和再現(xiàn)性的RNA收益率")和可重復(fù)的和可重復(fù)的rt - pcr(見圖“用戶之間的重現(xiàn)性"和“再現(xiàn)性工具包之間很多",和表格),，使其在臨床診斷測試中非常可靠,。

經(jīng)處理的樣本中,，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產(chǎn)量≥3 μg。圖“RNA產(chǎn)率和純度-自動化處理"表示的是由3個操作員使用3個試劑盒批次的自動化方案制備的共288個樣品的RNA產(chǎn)率,。由于這些研究使用的是匯集的血液樣本,，而不是單獨的PAXgene血液RNA管，因此結(jié)果不能反映單個血樣的RNA產(chǎn)量,。由于產(chǎn)量高度依賴于捐助者,，個別產(chǎn)量可能有所不同。

當(dāng)使用高達30%的洗脫液時,，至少95%的樣品在RT-PCR中沒有顯示抑制作用,。使用自動化程序，通過定量,、實時RT-PCR檢測rna陰性樣本(水)和rna陽性樣本(人類全血)的β -球蛋白和FOS轉(zhuǎn)錄本序列,，無法檢測樣品之間的交叉污染。

用PAXgene血RNA系統(tǒng)純化的RNA和自動化的協(xié)議是高純度的,，因為缺乏RT-PCR抑制(見上文)和A260/A280值在1.8和2.2之間,。通過對β -肌動蛋白基因序列的實時定量PCR檢測，在≥95%的樣本中,，基因組DNA含量≤1% (w/w),。圖“RNA產(chǎn)量和純度-自動化處理"顯示了使用3個試劑盒批次的自動化方法制備的共288個樣品的A260/A280值和相對基因組DNA。

使用PAXgene血RNA系統(tǒng)的RNA純化自動化方案提供了高重復(fù)性和可重復(fù)性的RT-PCR結(jié)果,，如圖“自動和手動方案之間的重現(xiàn)性"所示,，這使得它在臨床診斷測試中非常可靠,。

過程

PAXgene Blood RNA程序簡單，可以使用手動或自動程序進行(見流程圖“手動PAXgene Blood RNA程序"和“自動PAXgene Blood RNA程序"),。

手動PAXgene血液RNA程序

將重懸的顆粒與蛋白酶K一起孵育在優(yōu)化的緩沖液中,，以實現(xiàn)蛋白質(zhì)消化。通過PAXgene Shredder旋轉(zhuǎn)柱進行額外的離心,，使細胞裂解液均質(zhì)并清除殘留的細胞碎片,，并將流過部分的上清液轉(zhuǎn)移到新鮮的微型離心管中。加入乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件,，將裂解液應(yīng)用于PAXgene RNA自旋柱,。在一個簡短的離心過程中，當(dāng)污染物通過時，RNA被選擇性地結(jié)合到PAXgene硅膜上,。在幾個有效的清洗步驟中去除剩余的污染物,。在第一和第二沖洗步驟之間，用DNase I處理膜以去除微量的結(jié)合DNA,。洗滌步驟結(jié)束后,，RNA在洗脫緩沖液中洗脫并熱變性。

全自動PAXgene血液RNA程序

QIAcube全自動樣品制備,，遵循與手動程序相同的步驟,，使您可以繼續(xù)使用PAXgene血液RNA試劑盒純化高質(zhì)量的RNA。

自動RNA純化協(xié)議包括兩部分(或協(xié)議),，“PAXgene Blood RNA Part A"和“PAXgene Blood RNA Part B",，在這兩部分之間有一個簡短的人工干預(yù)。

將離心,、洗滌,、重懸的核酸顆粒從PAXgene Blood RNA Tube轉(zhuǎn)移到加工管中，加工管放置在QIAcube工作臺上的熱搖器單元中,。操作者從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part A"協(xié)議,。QIAcube完成了在洗脫緩沖液中進行RNA洗脫的步驟。操作人員將含有純化RNA的微離心管轉(zhuǎn)移到QIAcube的熱激器單元中,。操作者從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part B"協(xié)議,，QIAcube進行熱變性。

平均樣品制備時間(基于12個樣品制備的數(shù)據(jù))是125分鐘,，只有大約20分鐘的動手時間,。

BD  PAXgene全血RNA采集管應(yīng)用程序

當(dāng)該試劑盒與PAXgene血液RNA管一起使用時，該系統(tǒng)提供全血的細胞內(nèi)RNA用于分子診斷檢測的RT-PCR,。