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Cell Freezing Medium Plus (1x)

Especially suitable for lymphocyte and stem cell cryopreservation

Catalog Number：PZ210R

01/產(chǎn)品概述

細胞藥物作為繼化學藥、生物藥之后出現(xiàn)的新型藥物在臨床上的應(yīng)用越來越廣泛,。尤其,，干細胞治療和免疫細胞治療在退行性、損傷性,、遺傳缺陷性疾病以及腫瘤的治療中具有巨大的優(yōu)勢和廣闊的發(fā)展前景，而高效安全的細胞制劑是細胞治療中的關(guān)鍵因素,。在細胞培養(yǎng)中,，細胞凍存是最關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，尤其在細胞治療,、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求,。

傳統(tǒng)的程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養(yǎng)基、血清,、DMSO,。血清大多采用胎牛血清，含有動物源性物質(zhì),，成分復(fù)雜,，血清中未知成分和病毒等感染物質(zhì)會給凍存帶來影響與風險。該方法在科研上廣泛使用,，但是顯然已經(jīng)不能適應(yīng)現(xiàn)今細胞治療的應(yīng)用場景,。

針對干細胞和免疫細胞的凍存，LeapWal Biotech推出一款Cell Freezing Medium Plus (1x),，是一種化學成分明確,、無動物源成分、使用醫(yī)藥級原料的即用型細胞凍存液,，尤其適合淋巴細胞和干細胞的凍存,。這款產(chǎn)品操作簡單，無需程序降溫,，無動物源性蛋白,，不含血清，病毒,、病菌和支原體等污染可能性低,，不僅能有效,、安全地保護細胞，同時,，使用藥用級原料,，所有成分均明確，極大降低批次間差異,。適用于干細胞,、免疫細胞以及大多數(shù)細胞系凍存。

02/產(chǎn)品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸,。4℃保存,，有效期12個月。若長期不用,，可-30℃至-10℃保存,，有效期24個月。

04/產(chǎn)品特點

即用型細胞凍存液,，無需程序降溫,，可直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5年）

安全性高,，無動物源性蛋白,，不含血清，病毒,、病菌和支原體等污染可能性低

復(fù)蘇后的細胞存活率優(yōu)異,，復(fù)蘇率高達90% 以上，細胞活力好

使用藥用級原料,，所有成分均明確,，極大降低批次間差異

05/實驗流程概要

06/實驗步驟

一：細胞凍存步驟

1. 選擇處于指數(shù)生長期的細胞，按照常規(guī)方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中,。

2. 1000 rpm-2000 rpm,，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細胞沉淀,，棄上清液,。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 重懸細胞，制成細胞懸液,。

? 按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量,，推薦凍存密度：1x10^6 至5x10^6cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中,，建議每管1mL或1.5mL,。

5. 直接將細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。如果想放入液氮中長期保存,，需先放入-80℃冰箱至少12小時,，方可移至液氮罐中長期保存。

二：凍存細胞復(fù)蘇步驟

1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養(yǎng)基,。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞,，立即放入37℃水浴鍋或其他細胞復(fù)蘇設(shè)備中，迅速解凍,。

3. 將凍存管中的細胞懸液逐滴轉(zhuǎn)移至預(yù)先準備好的含*培養(yǎng)基的離心管中,，1000 rpm-1500 rpm，離心5分鐘,，收集細胞沉淀,，棄上清（操作時小心，切勿將細胞沉淀移去）,。

4. 加入適量平衡至室溫的*培養(yǎng)基重懸細胞,，接種到事先準備好的培養(yǎng)容器中，輕輕搖晃培養(yǎng)容器,，使細胞分布均勻,。

5. 鏡檢細胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法進行細胞常規(guī)培養(yǎng),。培養(yǎng)5-24h后，觀察細胞狀態(tài),，可視情況更換新鮮細胞培養(yǎng)液,。

07/適用范圍

LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 適用于干細胞、免疫細胞以及大多數(shù)細胞系凍存,。該款凍存液使用藥用級原料,，化學成分明確，適合細胞儲存,、細胞治療以及科學研究等不同場景使用,。

08/質(zhì)量控制

LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 通過嚴格的內(nèi)毒素、滲透壓,、pH測試和無菌檢測（細菌,、真菌和支原體檢測）。

09/注意事項

1. 若長期不用,，本產(chǎn)品可-30℃至-10℃保存,，再次使用時，請在2-8℃融化LeapWalTM  Cell Freezing Medium Plus(1x),，避免反復(fù)凍融,。

2. 使用LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 凍存細胞后，應(yīng)盡量減少凍存細胞在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存,。

3. LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 尤其適合淋巴細胞或干細胞凍存,，建議使用本產(chǎn)品凍存細胞時，先對其進行試驗性凍存,、復(fù)蘇,、培養(yǎng)的預(yù)實驗，確認性能后再進行正式凍存,。

4. 該產(chǎn)品在室溫條件下放置的時間不宜過長,，以免影響凍存效率。

5. 免責聲明: 本公司將不為任何不正當使用此產(chǎn)品所發(fā)生的意外負責,。

6. 為了您的健康安全,，請規(guī)范操作，穿戴實驗服與手套開展實驗,。

7. 本產(chǎn)品僅供科研使用,，請勿用于臨床診斷及治療。

10/實驗案例分析

一,、凍存細胞復(fù)蘇存活率檢測

1. 選擇處于對數(shù)生長期的淋巴細胞,，按照常規(guī)方法收集細胞于離心管中。

2. 1000 rpm,，離心5分鐘,，收集培養(yǎng)細胞沉淀，棄上清液,。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) ,、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細胞,，制成細胞懸液,。凍存密度為1x106 cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中,，每管1mL,，放入-80℃冰箱中，冷凍保存,。

5. 凍存12個月后,，進行細胞復(fù)蘇，對復(fù)蘇后的細胞進行臺盼藍染色,，統(tǒng)計細胞存活率,。

二、凍存細胞復(fù)蘇生長曲線檢測

1. 選擇處于對數(shù)生長期的淋巴細胞,，按照常規(guī)方法收集細胞于離心管中,。

2. 1000 rpm，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細胞沉淀,，棄上清液,。

3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液,、B公司凍存液分別重懸細胞,，制成細胞懸液。凍存密度為2x105 cells/mL,。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中,，每管1mL，放入-80℃冰箱中,，冷凍保存,。

5. 凍存1個月后進行細胞復(fù)蘇，對復(fù)蘇后的細胞進行臺盼藍染色,，繪制生長曲線,。

11/其他相關(guān)產(chǎn)品