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Fructuslycii枸杞子探針法PCR鑒定試劑盒

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更新時間:2023-05-14 15:54:22瀏覽次數(shù):258次

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Fructuslycii枸杞子探針法PCR鑒定試劑盒
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Fructuslycii枸杞子探針法PCR鑒定試劑盒
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準(zhǔn)備物品:

清理液(A)                                   毫升

染色液(t B)                                 微升

稀釋液(C)                                   毫升

溶解液(tD)                                  毫升

產(chǎn)品說明書                                     1份

Fructuslycii枸杞子探針法PCR鑒定試劑盒
注意事項:

1.基礎(chǔ)程序,。

2.?dāng)U增溫度和延伸溫度。

3.反應(yīng)時間,。

4.循環(huán)次數(shù),。

5.片PCR 反應(yīng)液的配制。

6.PCR技術(shù)的基本原理,。

7.PCR的反應(yīng)動力學(xué),。

8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。

Fructuslycii枸杞子探針法PCR鑒定試劑盒
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反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增,。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右,。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段,。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC*隨機(jī)分布,,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補,,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。

⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點,, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會,。
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