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　　熒光素酶發(fā)光成像是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究的成像技術(shù)，其具有較高的靈敏度和選擇性,，能夠在活體內(nèi),、細(xì)胞內(nèi)以及分子水平上實(shí)現(xiàn)可視化成像,。本文將從作用、原理,、特點(diǎn)以及選型標(biāo)準(zhǔn)四個方面探討熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)的具體內(nèi)容,。

　　一、作用

　　熒光素酶（Luciferase）是一種廣泛存在于生物界的酶類,，在一些動物中起到生物熒光作用,，熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)利用熒光素酶與熒光素底物（Luciferin）的反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號,，以實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)區(qū)域的定量及定位等高分辨率成像,。

　　二、原理

　　熒光素酶的反應(yīng)原理是熒光素底物與ATP在熒光素酶的催化下進(jìn)行氧化反應(yīng),，生成二氧化碳,、AMP和氧化熒光素，并釋放出能量,。氧化熒光素激發(fā)的熒光光子可以經(jīng)過吸收器淬滅,，也可以導(dǎo)致染料重新激發(fā)和發(fā)光，之后通過成像設(shè)備記錄下來,。

　　三,、特點(diǎn)

　　1、靈敏度

　　熒光素酶發(fā)光成像具有較高的檢測靈敏度,，其能夠偵測到相對較弱的熒光發(fā)光,，能夠提供高分辨率的熒光圖像。

　　2,、高度選擇性

　　熒光素酶發(fā)光成像對絕大多數(shù)背景熒光有很好的區(qū)分度,，使其可以獲得非常高的檢測信噪比。

　　3,、實(shí)時性高

　　熒光素酶發(fā)光成像能夠以非常高的速度捕捉熒光事件,，從而使熒光素酶標(biāo)記物的變化能夠?qū)崟r呈現(xiàn)在屏幕上。

　　四,、選型標(biāo)準(zhǔn)

　　在使用熒光素酶發(fā)光成像技術(shù)時,，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的熒光素酶種類和底物。

　　1,、熒光素酶種類選擇

　　熒光素酶有多種不同的種類,，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆颖绢愋瓦x擇合適的熒光素酶。例如,，F(xiàn)irefly熒光素酶對哺乳動物細(xì)胞較為適用,，但對歐文斯毒蛇等其它生物的檢測靈敏度較低。因此，在選擇熒光素酶種類時,，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和樣本類型選擇合適的種類,。

　　2、熒光素底物的選擇

　　熒光素底物分為自發(fā)熒光和非自發(fā)熒光兩種,，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的熒光素底物,。自發(fā)熒光底物能夠極大提高檢測的靈敏度，但在嵌合蛋白的檢測中,，熒光素底物的自發(fā)熒光會對測量的結(jié)果產(chǎn)生影響,，因此應(yīng)選擇非自發(fā)熒光底物。