活體動物體內(nèi)光學成像主要采用生物發(fā)光與熒光兩種技術。生物發(fā)光是熒光素酶基因(Luciferase)標記細胞或DNA,熒光技術則采用綠色熒光蛋白,、紅色熒光蛋白等熒光報告基因和FITC、Cy5,、Cy7等熒光素及量子點(quantumdot,QD)進行標記,。
熒光素由于諸多優(yōu)點得到廣大科研人員的青睞,主要特點如下:
1.熒光素不會影響動物的正常生理功能,。
2.熒光素是280道爾頓的小分子,水溶性和脂溶性都非常好,,很容易穿透細胞膜和血腦屏障。
3.熒光素在體內(nèi)擴散速度快,,可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進入動物體內(nèi),。腹腔注射擴散較慢,,持續(xù)發(fā)光長,。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達熒光素酶的細胞開始發(fā)光,10min后強度達到穩(wěn)定的最高點,,在最高點持續(xù)約20~30min后開始衰減,,約3h后熒光素排除,發(fā)光全部消失,,最佳檢測時間是在注射后15~35min之間,;若進行熒光素靜脈注射,,擴散快,,但發(fā)光持續(xù)時間很短??蒲腥藛T根據(jù)大量的實驗總結出熒光素的合適的用量是150mg/kg,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素,。
4.觀察時間的間隔沒有最短限制,,只要觀察的條件控制一致就可以,。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程,,但是上一次底物的殘留曲線可以知道,可以控制對下一次觀察結果的影響,。
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