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間充質(zhì)干細(xì)胞微載體/片狀載體培養(yǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)解決方案
間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells,，MSC)是一類多能干細(xì)胞,，能夠分化為多種細(xì)胞類型，有很強(qiáng)的自我更新能力,，具有免疫調(diào)節(jié)功能,，且能分泌多種生物活性因子促進(jìn)組織修復(fù)和再生。因此,，MSC在再生醫(yī)學(xué),、組織工程、免疫調(diào)節(jié),、藥物篩選等方面有著廣泛的應(yīng)用潛力,。
MSC屬于貼壁依賴的細(xì)胞，通常需要附著在培養(yǎng)表面才能保持干性以及有效增殖和生長(zhǎng),。為了進(jìn)一步發(fā)揮MSC的功能,，通常會(huì)利用微載體或者片狀載體進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。在MSC的微載體/片狀載體培養(yǎng)過(guò)程中,，常規(guī)使用的是胰酶消化后的細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),，觀察MSC細(xì)胞濃度變化和活率變化，但也面臨一些問(wèn)題：
胰酶消化微載體上的細(xì)胞,，往往不能消化,；
胰酶過(guò)度消化也容易造成細(xì)胞損傷，活性下降,。
艾貝泰Countleader®雙熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,，搭配艾貝泰自產(chǎn)細(xì)胞裂解液A+B液，可很好的解決胰酶消化操作復(fù)雜,、結(jié)果準(zhǔn)確性低的問(wèn)題,。
MSC微載體培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法
首先將培養(yǎng)的MSC樣本分為兩份：
一份樣本中按等體積加入Reagent A100 裂解緩沖液處理微載體懸浮培養(yǎng)物，裂解緩沖液使細(xì)胞質(zhì)膜通透并從微載體上釋放細(xì)胞核,。然后用等體積的Reagent B穩(wěn)定細(xì)胞核,，形成穩(wěn)定的細(xì)胞核懸液(樣品1)，取樣品1與AOPI染料1:1 混合,，吸取15μL 染色后的細(xì)胞樣品加入到FL8-slides耗材的待測(cè)通道中(通道1),。
另外一份樣本(樣品2)同時(shí)與AOPI染料1:1 混合,， 吸取15μL染色后的細(xì)胞樣品加入到FL8-slides耗材的待測(cè)通道中(通道2)。
Countleader® FL 1000細(xì)胞計(jì)數(shù)儀內(nèi)置“Viability and Cell Count Assay A100 And B"分析方法,。通道1獲得總細(xì)胞濃度,，通道2獲得死細(xì)胞濃度。
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PI能夠與死細(xì)胞,、細(xì)胞裂解后的細(xì)胞核染色,，呈現(xiàn)紅色熒光。無(wú)需手動(dòng)計(jì)算,，設(shè)備軟件自行運(yùn)算,，直接快速、準(zhǔn)確的獲得微載體培養(yǎng)MSC的活細(xì)胞濃度以及活率,。
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| 通道1：總細(xì)胞核圖像 | 通道2：死細(xì)胞核圖像 |
MSC片狀載體培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法
收集2-3個(gè)片狀載體至50 mL離心管中,，加入適量體積(淹沒(méi)整個(gè)片狀載體為準(zhǔn))的Reagent A100 裂解緩沖液，裂解10 min(按照不同載體材質(zhì),，裂解時(shí)間可分別設(shè)置5 min,、10 min、15 min,、20 min等,，如果延長(zhǎng)時(shí)間后，細(xì)胞數(shù)量沒(méi)有顯著增加,，可以確定最佳孵育時(shí)間),，加入等體積的Reagent B 穩(wěn)定細(xì)胞核,，混合均勻,。
取裂解完畢后的混合液與AOPI染料1:1 混合,吸取15μL 染色后的細(xì)胞樣品加入到FL8-slides耗材的待測(cè)通道中。Countleader® FL 1000細(xì)胞計(jì)數(shù)儀內(nèi)置“Viability and Cell Count Assay (AOPI)"分析方法,，設(shè)置樣本名稱,、視野面積以及稀釋倍數(shù)。PI能夠與細(xì)胞裂解后的細(xì)胞核染色,，呈現(xiàn)紅色熒光,。
·裂解后細(xì)胞核圖片·
細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果：片載體細(xì)胞濃度（cells/cm2）=
注：艾貝泰提供的Reagent A100和Reagent B也可用于結(jié)團(tuán)細(xì)胞的裂解計(jì)數(shù)，精確獲得結(jié)團(tuán)細(xì)胞的計(jì)數(shù)結(jié)果,。
Countleader® FL 1000細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,，具備臺(tái)盼藍(lán)、AOPI雙熒光雙分析模式,，8通道耗材,，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好,，符合FDA的21 CFR Part11的要求,！
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Countleader® 系列細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,，可以滿足您的不同需求！
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