細胞庫的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格,、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定的細胞,。細胞庫是生物制藥的源頭,，是重中之重，對于生產(chǎn)或檢定用細胞庫,，各國監(jiān)管機構(gòu)一般要求三級管理,，即原始細胞庫（PCB）、主細胞庫（MCB）和工作細胞庫（WCB）,。PCB負責(zé)提供種子細胞,，經(jīng)過不斷的克隆、篩選和鑒定后,，形成MCB,，再通過傳代擴增等過程，最終形成WCB,，用于大規(guī)模的生物制品生產(chǎn),。如果穩(wěn)定表達細胞株或者商業(yè)化的細胞株為引進和購買的，也可以采用MCB和WCB組成的二級細胞庫管理,。當(dāng)然,，在某些特殊的情況下，也可以只選擇建立MCB一級細胞庫,，但需經(jīng)過監(jiān)管機構(gòu)批準,，足見其對細胞質(zhì)量和藥品安全的嚴格要求。PCB的數(shù)量是根據(jù)實際來計算的,，每個品種可能都不一樣,，需要考慮后續(xù)生產(chǎn)、檢定需要,、保藏年限,，檢測用數(shù)量,、復(fù)檢頻率等，MCB和WCB凍存多少數(shù)量,，根據(jù)需要確定,，需保證后續(xù)生產(chǎn)、檢定足夠,，即遵循“夠用原則",。

細胞庫建庫流程

干細胞療法已被證明是一種很有前途的創(chuàng)新療法，其中,，間充質(zhì)干細胞（MSC）憑借低免疫原性,、高增殖潛力以及免疫調(diào)節(jié)等特性被廣泛應(yīng)用研究。根據(jù)文獻統(tǒng)計,，截至2023年,，全球已有一千多項注冊臨床試驗使用MSC療法，12種MSC療法獲得監(jiān)管機構(gòu)批準商業(yè)化,。未來,，間充質(zhì)干細胞將在更多疾病的治療中發(fā)揮重要作用。然而,，MSC細胞的凍存卻非易事，成功建立可靠的MSC細胞庫往往需要處理好各種操作細節(jié),，此外,，MSC在超低溫環(huán)境下，代謝活性和黏附能力出現(xiàn)降低,，細胞膜和細胞骨架發(fā)生變化,。更為常見的是，MSC 經(jīng)過超低溫凍存,，基本上都存在細胞活率下降問題,，這對臨床治療效果有一定影響。

MSC作為種子細胞或者工作細胞,，細胞凍存是繞不開的步驟,。如ICH Q5D所述，防止外源因子污染,，保證細胞在各個凍存管中均勻分布,，保證復(fù)蘇細胞具有恒定而符合生產(chǎn)要求的活力，是細胞庫制備的三個基本要求,。而目前國內(nèi)大部分生物制藥企業(yè)還是采用手動的方式來進行細胞灌裝,，其存在細胞樣品與凍存液接觸時間長導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差使得細胞庫質(zhì)量差、大量的人工重復(fù)操作帶來的誤差以及染菌風(fēng)險等問題,，為了節(jié)省建庫的時間,、提高細胞的一致性、降低污染風(fēng)險、節(jié)省質(zhì)量控制的成本,，需要一種可靠有效的細胞灌裝方法,，本篇將為大家重點介紹高通量自動化灌裝MSC細胞的解決方案—艾貝泰AbioFill V100細胞灌裝系統(tǒng)。

MSC細胞灌裝實驗內(nèi)容

1.實驗材料：

細胞：貼壁的間充質(zhì)干細胞（MSC）凍存液：90%FBS+10%DMSO凍存管：Corning 430659（2ml,Ex）AO/PI染色液程序凍存盒等

2.儀器設(shè)備：

灌裝系統(tǒng)：AbioFill V100細胞灌裝系統(tǒng)細胞質(zhì)量監(jiān)控：Countleader細胞計數(shù)儀FL1000

3.實驗參數(shù)：

灌注模式：開蓋-灌注-封蓋灌注流速：350μL/s灌注體積：1000μL  

4.細胞灌裝視頻

5.討論：MSC細胞上機前用30mL凍存液重懸（50mL離心管體系）,，灌裝前細胞留樣進行細胞計數(shù),，測得細胞活率為97.55%，細胞密度約1.15E6cells/mL,。使用灌裝系統(tǒng)進行24支凍存管灌注,，灌裝體積為1mL/管，灌裝后取樣對24支凍存管的細胞進行細胞計數(shù),，并使用程序降溫盒在-80℃凍存此24支細胞,。凍存24h后，37℃水浴復(fù)蘇,，進行細胞計數(shù),。

灌注前/后、復(fù)蘇后平均活率（左）與平均活細胞密度（右）柱狀圖（n=24）

灌注前/后,、復(fù)蘇后平均活率與活細胞密度表（n=24）

經(jīng)統(tǒng)計分析,，發(fā)現(xiàn)灌注前、后細胞活率與細胞濃度差異不大,，復(fù)蘇后的細胞活率稍微有所下降,，下降幅度約為3%，為可接受范圍,?；盥氏陆悼赡芤驗楣嘌b后取樣計數(shù)過程使細胞在常溫凍存液內(nèi)時間過長導(dǎo)致，縮短操作時間可以有效避免此活率下降,。

以上實驗證實,，AbioFill V100全自動細胞灌裝系統(tǒng)能自動化、高效地灌裝MSC細胞,，灌裝前后細胞質(zhì)量不受到影響,，可以建立高質(zhì)量、均一性的MSC細胞庫,，解決MSC細胞大規(guī)模凍存的工業(yè)化問題,，促進細胞治療行業(yè)的良好發(fā)展。

AbioFill V100灌裝系統(tǒng)

FL1000細胞計數(shù)儀