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廣州市艾貝泰生物科技有限公司

體外高效電轉(zhuǎn)化儀的操作要領(lǐng)

時(shí)間:2022-7-26 閱讀:8309
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  胞電轉(zhuǎn)染(電轉(zhuǎn)),,也叫細(xì)胞電穿孔(electroporation),,是把外源大分子物質(zhì)DNA,、RNA,、siRNA、蛋白質(zhì)等以及一些小分子導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)部的重要方法,。
 
  體外高效電轉(zhuǎn)化儀在瞬間強(qiáng)大電場(chǎng)的作用下,,溶液中細(xì)胞的細(xì)胞膜具有了一定的通透性,帶電的外源物質(zhì)以類似電泳的方式進(jìn)入細(xì)胞膜,。由于細(xì)胞膜磷脂雙分子層的電阻很大,,細(xì)胞外部電流場(chǎng)產(chǎn)生的細(xì)胞兩極電壓都被細(xì)胞膜承受,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到的電壓可以忽略不計(jì),,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部幾乎沒(méi)有電流,,因此也決定了正常范圍內(nèi)的電轉(zhuǎn)過(guò)程中細(xì)胞毒性很小。電場(chǎng)使DNA等物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞膜后只能停止在細(xì)胞膜附近,,隨后細(xì)胞本身的機(jī)制可以允許這些物質(zhì)到細(xì)胞核等處,。
 
  體外高效電轉(zhuǎn)化儀使用:
 
  1.選擇合適的電場(chǎng)強(qiáng)度合適的電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要,電場(chǎng)強(qiáng)度不能過(guò)高,,過(guò)高會(huì)增加細(xì)胞的死亡率,;也不能過(guò)低,過(guò)低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔,。不同細(xì)胞系具有不同的*佳場(chǎng)強(qiáng)值,,實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測(cè)定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的電場(chǎng)強(qiáng)度。
 
  2.細(xì)胞的選擇用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞(15代以內(nèi),,傳代后2d),。因?yàn)樘幱趯?duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞分裂旺盛,表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差,,電轉(zhuǎn)后,,細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA,。
 
  3.質(zhì)粒的質(zhì)量應(yīng)選擇純度高的質(zhì)粒,,DNA/RNA應(yīng)該超純(A260/A280>1.8),其次應(yīng)不含內(nèi)毒素,,同時(shí)質(zhì)粒應(yīng)溶于雙蒸水而不是TE緩沖溶液,。另外,DNA濃度不宜過(guò)高,。
 
  4.選擇合適的電轉(zhuǎn)染試劑電擊會(huì)對(duì)細(xì)胞造成一定程度的傷害,在轉(zhuǎn)染試劑的選擇上要注意,,應(yīng)選擇具有細(xì)胞膜修復(fù)成分的電轉(zhuǎn)染試劑,,如Entranster-E,可將電擊對(duì)細(xì)胞的損傷降低。

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