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色譜基礎(chǔ)知識
色譜技術(shù)是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)分析的分離方法,通過樣品在固定相和流動相之間的分配差異,,實現(xiàn)混合物中各組分的分離和檢測。以下是色譜技術(shù)的基本概念和分類,以及其應(yīng)用領(lǐng)域的簡介。
色譜技術(shù)的基本概念
1,、固定相
固定相是色譜系統(tǒng)中用于吸附或分配樣品組分的材料,,可以是固體或液體,,通常涂覆在支持介質(zhì)上。固定相的特性決定了分離的選擇性,。
2,、流動相
流動相是帶動樣品通過固定相的液體或氣體,樣品組分在流動相和固定相之間分配,,形成不同的滯留時間,,從而實現(xiàn)分離。
3,、保留時間保留時間
樣品組分從進(jìn)樣到被檢測到所需的時間,,用于表征不同組分的分離行為。
4,、分離機制
樣品分離主要基于以下機制之一或組合:
吸附作用
分配作用
離子交換
分子排阻
色譜的分類
根據(jù)操作模式和分離原理,,色譜技術(shù)主要分為以下幾類:
1、按流動相分類
氣相色譜:
以氣體為流動相,,適合揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性樣品,。
液相色譜:
以液體為流動相,適合不揮發(fā)或熱不穩(wěn)定樣品,。
2,、按固定相分類
柱色譜:
固定相填充在色譜柱中,是最常見的形式,。
薄層色譜:
固定相涂覆在玻璃板或塑料片上,,適合快速篩查。
3,、按分離機制分類
分配色譜:
利用樣品在流動相和固定相間的溶解性差異,。
吸附色譜:
利用樣品分子與固定相表面吸附能力的不同。
離子交換色譜:
利用樣品離子與固定相離子交換能力的差異,。
凝膠色譜:
根據(jù)分子大小差異進(jìn)行分離,,也稱分子篩色譜。
液相色譜(HPLC)的知識
HPLC 是現(xiàn)代液相色譜的技術(shù),,使用高壓泵驅(qū)動流動相,,固定相通常是填充在色譜柱中的顆粒材料,。
1、主要組件
泵:提供高壓流動相輸送,。
進(jìn)樣器:用于準(zhǔn)確控制樣品的進(jìn)樣量,。
色譜柱:包含固定相,用于分離樣品,。
檢測器:檢測經(jīng)過色譜柱后的樣品組分,,常見類型有UV、熒光,、質(zhì)譜等,。
2、分離模式
正相色譜:固定相極性高,,流動相極性低,,適合非極性化合物分離。
反相色譜:固定相極性低(如C18柱),,流動相極性高,,適合極性化合物分離。