反相色譜（Reverse Phase Chromatography,，RPC）是一種基于樣品成分在不同親水性條件下在固定相和流動(dòng)相之間的相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)分離和定量的色譜技術(shù),。它在醫(yī)藥、化工、生物等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。

原理：

RPC的固定相通常是非極性的,，如C18（十八烷基）鍵合硅膠，而流動(dòng)相則是極性的,，如水和有機(jī)溶劑（如甲醇,、乙腈等）的混合物。樣品通過(guò)色譜柱時(shí),，根據(jù)溶質(zhì)的疏水性（即親水性）差異進(jìn)行分離,。疏水性越大的溶質(zhì)在固定相上的保留時(shí)間越長(zhǎng)，因此洗脫時(shí)間越晚,；而親水性越大的溶質(zhì)在流動(dòng)相中的移動(dòng)速度越快,，因此洗脫時(shí)間越早。

影響因素：

固定相：固定相的種類和鏈長(zhǎng)會(huì)影響樣品的保留值,。例如,，C18固定相適用于大多數(shù)化合物，包括非極性和極性小分子,。

流動(dòng)相組成：流動(dòng)相的極性越大,，溶質(zhì)的分配系數(shù)越大，洗脫時(shí)間越短,。通常采用降低流動(dòng)相極性（水含量）的線性梯度洗脫法,。

溫度：溫度+，流動(dòng)相黏度-,，流動(dòng)速度+,，且流動(dòng)相與固定相之間的傳質(zhì)速度+，使分辨率增加,。但溫度上升也會(huì)導(dǎo)致疏水性作用減弱,，因此升高溫度時(shí)需要考慮目標(biāo)物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。

樣品的分子結(jié)構(gòu)：樣品的極性越弱,，疏水性越強(qiáng)，保留值越大,。

色譜柱的選擇：

色譜柱的選擇對(duì)RPC的分離效果至關(guān)重要,。常用的色譜柱包括C18、C8,、苯基柱等,，它們適用于不同的化合物和分離需求。例如,，C18色譜柱是通用型色譜柱,，適用于多種化合物的分析。

應(yīng)用：

RPC在蛋白質(zhì)、肽,、氨基酸,、核酸、甾類,、脂類,、脂肪酸、糖類,、植物堿等含有非極性基團(tuán)的各種物質(zhì)的分離中都有應(yīng)用,。例如，它可以用于合成寡核苷酸的快速與高分離度分離等,。