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熒光分光光度計是屬于分光光度計的一種,，在生物化學,、生物醫(yī)學、環(huán)境化工等部門的應用較為廣泛，熒光分光光度計是對經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析的儀器物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,，在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,，從而產(chǎn)生熒光．不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜,。熒光分光光度計的工作原理就是根據(jù)這一現(xiàn)象設(shè)計的,，是由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,，熒光經(jīng)過濾過和反射后,，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來,。
二,、熒光分光光度計構(gòu)成
隨著科技的進步帶動著生產(chǎn)工藝技術(shù)的提升熒光分光光度計的從手控式熒光分光光度計發(fā)展到自動記錄式熒光分光光度計以及現(xiàn)在的計算機控制式熒光分光光度計都是有以下幾部分組成。
1,、光源
一般是為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,，后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強度幾乎相等,，所以更為常用,。
2、激發(fā)單色器
作為篩選特定的激發(fā)光譜器是置于光源和樣品室之間,，也稱喂單色器,。
3、發(fā)射單色器
作為篩選特定的發(fā)射光譜器也成為第二單色器,，是至于置于樣品室和檢測器之間,。常采用光柵為單色器
4、樣品室
用于盛放樣品的空間,，通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成,。樣品不同時光源與檢測器的角度有所不同，測量固體樣品是直角,，測量液體樣品時銳角,。
5、檢測器
作為光信號放大的同時還是將光信號轉(zhuǎn)化為電信號,。一般是用光電管或光電倍增管作檢測器,。
三、熒光分光光度計使用方法
（一）實驗前準備工作
1,、實驗所需樣品若是液體時,，要檢查濃度范圍是否合適，是否需要稀釋,，以及所需要的溶劑類型以及稀釋倍數(shù),。
2,、實驗所需樣品若是固體時，要產(chǎn)看是否為均勻粉末,、片狀,、是否可直接測定等。
3,、檢查電源電壓是否符合設(shè)備要求,，以及接地設(shè)施是否連接。
4,、查看環(huán)境是否符合設(shè)備工作所需環(huán)境要求,，環(huán)境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場,、電場干擾,。
5、測試前設(shè)備要進行預熱
（二）操作步驟
1,、在之前的準備工作完成后,，接通電源，然后打開主機開關(guān)[much]后打開光源開關(guān),。
注意：要根據(jù)使用說明來啟動計算機,。并且要進行預熱。
2,、預熱完成夠,，按照說明查看是否需要對設(shè)備進行校準。
注意：儀器一般是在20天內(nèi)必須從新進行一次激發(fā)校準和發(fā)射校準
3,、.基本測定
①熒光激發(fā)光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù),，掃描發(fā)射波長，找到max λ ex,、max λ em，以此為發(fā)射波長,，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數(shù),，便得到激發(fā)光譜。
②熒光發(fā)射光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù),，掃描激發(fā)波長,，找到max λ ex、max λ em,，以此為激發(fā)波長,，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜,。
③差譜測定
設(shè)置儀器參數(shù),，選擇合適的工作方式,，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下,，掃描樣品溶液的發(fā)射波長,，得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜,。
④峰面積積分
選擇適當?shù)墓ぷ鞣绞?，對樣品溶液進行積分操作，即得到峰面積積分,。
⑤熒光強度
選擇合適的測量參數(shù),，設(shè)置λ ex、λ em,，采用定點讀數(shù)或掃描方式,，即可測得所選波長處的熒光強度。
⑥定量測定
配制一系列已知濃度的標準溶液,，在一定的測定條件下,，設(shè)置λ ex、λ em,，按照由稀至濃的次序,，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度濃度的工作曲線,，不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強度,，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
4,、分析結(jié)果
①熒光激發(fā)光譜,、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。
②峰面積積分,、熒光強度由儀器控制電腦計算顯示,。
③定量測試：在相同的測定條件下，測定一系列已知濃度的標準溶液的熒光強度,，繪制出熒光強度-濃度的工作曲線,。濃度未知的溶液的熒光強度測定后，由工作曲線求出該溶液的濃度,。
四,、熒光粉光光度計使用注意事項
（一）日常注意事項
1、開機時,，請先開氙燈電源,，再開主機電源。注意開機順序,。
2,、每次開機后請先確認兩邊排熱風扇是否工作正常如發(fā)現(xiàn)風扇有故障,，應停機檢查。
3,、主機工作時頂部排熱器溫度很高,，切勿觸摸以免受傷。
4,、請盡量減少不必要的氙燈觸發(fā)次數(shù),，避免氙燈在高壓下反復觸發(fā)。關(guān)閉氙燈電源后,，若要重新使用,，請等待60秒以后重新觸發(fā)。
5,、運行未知濃度的樣品測試時,，靈敏度設(shè)置請從低位向高圍( 0-7)逐步設(shè)置。
6,、當操作者錯誤操作或其他干擾引起微機錯誤時,，應該立即關(guān)斷主機電源重新啟動，但無須關(guān)斷氙燈電源,。
7,、單色器內(nèi)用螺絲緊固處不得松動。
（二）其他注意事項
1,、所需溶液要是已經(jīng)配置好要查看在低溫冰箱里的存放的時間是否超過一星期,，如果已超過則需從新配置。
2,、實驗所用的樣品池是四面透光的石英池,，拿取的時候用手指掐住池體的上角部，不能接觸到四個面,，清洗樣品池后應用擦鏡紙對其四個面進行輕輕擦拭,。
3、在測試樣品時,，注意熒光強度范圍的設(shè)定不要太高,，以免測得的熒光強度超過儀器的測定上限。
4,、實驗結(jié)束后及時的清理臺面，處理廢液,，清洗和放置好樣品池,，將下次要用的溶液放回冰箱。
5,、清潔儀器外表時請勿使用乙醇等有機溶劑,，請勿在工作中清潔,。不使用時請加防塵罩要保持比色皿的清潔。
五,、熒光分光光度計選購指南
1,、首先要考慮品牌以及代理商信譽以及售后服務，不僅關(guān)系到儀器的質(zhì)量穩(wěn)定性,，還關(guān)系到以后的維修服務,。
2、然后要關(guān)注儀器的狹縫(光譜帶寬),，狹縫還決定了儀器的分辨率,，良好的分辨率可以分辨間隔很小的波峰。
3,、儀器的信噪比是一項非常重要的參數(shù),，它一定程度上反映儀器的檢出能力。
4,、波長[accuracy]度和重復性也是一項比較重要的指標,。
5、掃描速度雖然也很重要,，但這和需求有關(guān)系,，如果對時間沒有太多的要求，可以不必在意,。
6,、綜合以上進行對比選購性價比較為高的。
六,、熒光分光光度計與其他分光光度計不同點
相同點：比色皿,、檢測器、記錄儀這些基本一樣
不同點：光源,，是否需要色劑
紫外,、可見分光光度計在紫外區(qū)使用氫燈或氘燈，在可見光區(qū)使用氘燈或溴鎢燈,。它們發(fā)出的都是連續(xù)光譜,，通過三棱鏡（中檔）、光柵（高檔）,、濾光片（低級）等分光,，這樣兩種燈組合基本涵蓋了紫外-可見光的波長范圍。
熒光分光光度計由氙弧燈發(fā)出的光通過切光器使其變成斷續(xù)之光以及激發(fā)光單色器變成單色光后,，此光即為熒光物質(zhì)的激發(fā)光,，被測的熒光物質(zhì)在激發(fā)光照射下所發(fā)出的熒光，經(jīng)過單色器變成單色熒光后照射于測樣品用的光電倍增管上,。
紫外-可見分光光度計可用于大部分有色物質(zhì)的定量監(jiān)測,，通常需要使用各種各樣的顯色劑,。熒光分光光度計可用于測試發(fā)光材料的發(fā)射光譜＼激發(fā)光譜＼時間掃描，不需要顯色劑,。