常用培養(yǎng)基

                                                     檢碩科學(xué)器材（上海）有限公司

一、糖發(fā)酵管成分：牛肉膏 5克,蛋白胨 10克,氯化鈉 3克,磷酸氫二鈉  2克,0.2％滇麝香草酚藍(lán)溶液 12毫升,蒸餾水 1000毫升,PH 7.4制法1. 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi),，121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。2. 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶1000 毫升,，121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。另將各種糖類(lèi)分別配好10%溶液，同時(shí)高壓滅菌,。將5毫升糖溶液加入于100 毫升培養(yǎng)基內(nèi),，以無(wú)菌操作分裝小試管。注：蔗糖不純,，加熱后會(huì)自行水解者,，應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。 試驗(yàn)方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,，于36攝氏度±1攝氏度培養(yǎng),，一般觀(guān)察2～3d。遲緩反應(yīng)需觀(guān)察14~30d,。 

 二,、乳糖膽鹽發(fā)酵管成分：蛋白胨 20克,豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5克,乳糖 10克,0.04%滇甲酚紫水溶液 25毫升,蒸餾水 1000毫升制法：將蛋白胨,，膽鹽及乳糖溶于水中,，校正pH，加入指示劑,，分裝每管10 毫升,，并放入一個(gè)小倒管，115攝氏度高壓滅菌15分鐘,。注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外,，其他成分加倍。 

 三,、5％乳糖發(fā)酵管成分：蛋白胨 0.2克,氯化鈉 0.5克,乳糖 5克,2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液 1.2毫升,蒸餾水 100毫升,pH 7.4制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50毫升蒸餾水內(nèi),，校正pH。將乳糖溶解于另外50毫升蒸餾水內(nèi),，分別滅菌121 攝氏度 15分鐘,，將兩液混合，以無(wú)菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi),。注：在此培養(yǎng)基內(nèi),，大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細(xì)菌可于ld內(nèi)發(fā)酵。 

 四,、緩沖葡萄糖蛋白胨水（MR和VP試驗(yàn)用）成分：磷酸氫二鉀 5克,多胨 7克,葡萄糖 5克,蒸餾水 1000毫升制法：溶化后校正pH,，分裝試管,，每管1毫升 ，121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。甲基紅（MR）試驗(yàn)：自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,，于36±1攝氏度培養(yǎng)2～5d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25攝氏度培養(yǎng),。滴加甲基紅試劑一滴,，立即觀(guān)察結(jié)果。鮮紅色為陽(yáng)性,，黃色為陰性,，甲基紅試劑配法：10毫克甲基紅溶于30毫升95％乙醇中，然后加入20 毫升蒸餾水,。V-P試驗(yàn)：用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,，于36±1攝氏度培養(yǎng)2～4d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25攝氏度培養(yǎng),。加入6％α-萘酚-乙醇溶液0.5毫升和40％氫氧化鉀溶液0.2毫升充分振搖試管,，觀(guān)察結(jié)果陽(yáng)性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性,，應(yīng)放在36±1攝氏度下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀(guān)察,。 

五、營(yíng)養(yǎng)明膠成分：蛋白胨 5克,牛肉膏 3克,明膠 120克,蒸餾水 1000毫升,pH 6.8~7.0制法：加熱溶解,，校正至pH7.4～7.6,，分裝小管，121攝氏度高壓滅菌10分鐘,，取出后迅速冷卻,，使其凝固，復(fù)查最終pH應(yīng)為6.8～7.0,。試驗(yàn)方法：用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種,，放在22～25攝氏度培養(yǎng)，每天觀(guān)察結(jié)果,，記錄液化時(shí)間,。或放在36士1攝氏度培養(yǎng),，每天取出,，放冰箱內(nèi)30分鐘后再觀(guān)察結(jié)果。

 六,、苯丙氨酸培養(yǎng)基成分：酵母浸膏 3克,DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1克）2克,磷酸氫二鈉 1克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000毫升制法：加熱溶解后分裝試管,，121攝氏度高壓滅菌15分鐘，使成斜面。試驗(yàn)方法：自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,，移種于苯丙氨酸瓊脂,，在36士1攝氏度培養(yǎng)4h或18～24h,，滴加10％三氯化鐵溶液2～3滴,，自斜面培養(yǎng)物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性者呈深綠色,。 

七,、蛋白胨水（靛基質(zhì)試驗(yàn)用）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）20克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4制法：按上述成分配制，分裝小試管,，121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。靛基質(zhì)試劑柯凡克試劑：將5克對(duì)二甲氨基溶解于75毫升戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25毫升,。歐-波試劑：將1克對(duì)二甲氨基溶解于95毫升95%乙醇內(nèi),，然后緩慢加入濃鹽酸20 毫升。試驗(yàn)方法：挑取小量培養(yǎng)物接種,，在36士1攝氏度培養(yǎng)1～2d,，必要時(shí)可培養(yǎng)4～5d。加入柯凡克試劑約0.5毫升,，輕搖試管,，陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色；或加入歐-波試劑約0.5 毫升,，沿管壁流下,，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色,。注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸,。每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用,。 

八,、硫酸亞鐵瓊脂（硫化氫試驗(yàn)用）成分：牛肉膏 3克,酵母浸膏 3克,蛋白胨 10克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.3克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000 毫升制法：加熱溶解，校正pH,，分裝試管,，115攝氏度高壓滅菌15分鐘，取出直立候其凝固,。試驗(yàn)方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物,，沿管壁穿刺，于36士1攝氏度培養(yǎng)1～2d,，觀(guān)察結(jié)果,。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏Ｗⅲ耗c桿菌科細(xì)菌測(cè)定硫化氫的產(chǎn)生,，應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基,。  

九,、尿素瓊脂成分：蛋白胨 1克,氯化鈉5克葡萄糖1克,,4%酚紅溶液 3 毫升,瓊脂 20克,蒸餾水 1000 毫升,20%尿素溶液 100毫升制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH,，加入瓊脂,，加熱溶化并分裝燒瓶。121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。冷至50～55攝氏度,，加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液，尿素的最終濃度為2％,，最終pH應(yīng)為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內(nèi),，放成斜面?zhèn)溆谩Ｔ囼?yàn)方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,，在36士1攝氏度培養(yǎng)24h,，觀(guān)察結(jié)果。尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色,。 

十,、（KCN）培養(yǎng)基成分：蛋白胨10克,氯化鈉 5克,,磷酸氫二鈉 5.64克,蒸餾水 1000 毫升,0.5%溶液 20 毫升,pH 7.6制法：將除以外的成分配好后分裝燒瓶，121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻,。每100 毫升培養(yǎng)基加入0.5％溶液2.0毫升（最后濃度為1：10000），分裝于12mm*100mm滅菌試管,，每管約4毫升,，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4攝氏度冰箱內(nèi),，至少可保存兩個(gè)月,。同時(shí)，培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基,，分裝試管備用,。 

十一、營(yíng)養(yǎng)瓊脂成分：蛋白胨10克,牛肉膏3克,氯化鈉5克,瓊脂15～20克,蒸餾水1000毫升制法：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi),，加入15%氫氧化鈉溶液約2毫升,，校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂,，加熱煮沸,，使瓊脂溶化分裝燒瓶，121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。注：此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用,，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計(jì)數(shù)，瓊脂量為1.5%,；如作成平板或斜面,，則應(yīng)為2%。  

十二,、營(yíng)養(yǎng)肉湯成分：蛋白胨 10克,牛肉膏 3克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4制法：按上述成分混合,，溶解后校正pH，分裝燒瓶,，每瓶225 毫升 ,，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。 

十三,、緩沖蛋白胨水（BP）成分：蛋白胨 10克,氯化鈉 5克,磷酸氫二鈉 1.5克,蒸餾水1000毫升,pH 7.2制法：按上述成分配好后以大燒瓶裝，121攝氏度高壓滅菌15分鐘,。臨用時(shí)無(wú)菌分裝每瓶225毫升,。注：本培養(yǎng)基供沙門(mén)氏菌前增菌用。注：本培養(yǎng)基供沙門(mén)氏菌前增菌用,。 

十四,、EC肉湯成分：胰蛋白胨 20克,3號(hào)膽鹽（或混合膽鹽）1.5克,乳糖 5克,磷酸氫二鉀 4克 1.5克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升制法：將上述成分混合，溶解后,，分裝有發(fā)酵倒管的試管中,，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。最終pH為6.9±0.2,。 

十五,、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）基礎(chǔ)培養(yǎng)基多胨或眎胨 5克,膽鹽 1克,碳酸鈣 10克,硫代硫酸鈉 3克,蒸餾水 1000毫升,碘溶液 碘 6克,碘化鉀 5克,蒸餾水 20 毫升制法：將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解,，分裝每瓶100毫升,。分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖，使其中的碳酸鈣混勻,，121攝氏度高壓滅菌15分鐘備用,。臨用時(shí)每100毫升基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2毫升，,0.1%煌綠溶液1毫升,。 

十六,、鹽胱氨酸增菌液（SC）成分：蛋白胨 5克,乳糖 4克,磷酸氫二鈉 5.5克,L-胱氨酸 0.01克,蒸餾水 1000毫升1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法：稱(chēng)取L-胱氨酸0.1克或（DL-胱氨酸0.2克），加1mol/L氫氧化鈉1.5毫升,，使溶解,，再加入蒸餾水8.5毫升即成。制法和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900毫升蒸餾水中,，加熱煮沸,，候冷備用。溶解于100毫升蒸餾水中，加熱煮沸,，候冷,，以無(wú)菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1毫升,。分裝于滅菌瓶中．每瓶100毫升,，pH應(yīng)為7.0±0.1。 

十七,、亞硫酸鉍瓊脂（BS）成分：蛋白胨 10克,牛肉膏 5克,葡萄糖 5克,硫酸亞鐵 0.3克,磷酸氫二鈉 4克,煌綠 0.025克,檸檬酸鉍銨 2克,亞硫酸鈉 6克,瓊脂 18~20克,蒸餾水 1000毫升,pH 7.5制法：1.將前面5種成分溶解于300毫升蒸餾水中,。2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50毫升蒸餾水溶解。3將瓊脂于600毫升蒸餾水中煮沸溶解,，冷至80攝氏度,。4將以上三液合并，補(bǔ)充蒸餾水至1000毫升,，校正pH,，加0.5%煌綠水溶液5毫升，搖勻,，冷至50～55攝氏度,，傾注平皿。注：此培養(yǎng)基不需高壓滅菌,。制備過(guò)程不宜過(guò)分加熱,，以免降低其選擇性。應(yīng)在臨用前一天制備,，貯存于室溫暗處,，超過(guò)48h不宜使用。  

十八,、三糖鐵瓊脂（TSI）成分：蛋白胨 20克,牛肉膏 5克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化鈉 5克,硫酸亞鐵銨 0.2克,硫代硫酸鈉 0.2克,瓊脂 12克,酚紅 0.025克,蒸餾水 1000 毫升,pH 7.4 制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,，校正pH，加入瓊脂,，加熱煮沸,，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 毫升,，搖勻,，分裝試管。裝量宜多些,，以便得到較高的底層,。121攝氏度高壓滅菌15分鐘，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

 十九,、三糖鐵瓊脂換用方法成分：蛋白胨15克,眎胨5克,牛肉膏 3克,酵母膏 3克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化鈉 5克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.3克,瓊脂 12克,酚紅 0.025克,蒸餾水 1000 毫升,pH7.4制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,，校正pH,，加入瓊脂，加熱煮沸,，以溶化瓊脂,。加入0.2%酚紅水溶液12.5 毫升，搖勻,，分裝試管,，裝量宜多些，以便得到較高的底層,。121攝氏度高壓滅菌15分鐘,，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

 二十、嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基成分：蛋白胨2克,氯化鈉 按不同量加,蒸餾水100 毫升,pH7.7制法：配制2%蛋白胨水,，校正pH,，共配制5瓶，每瓶100毫升,。每瓶分別加入不同量的氯化鈉：（1）不加,；（2）3克；（3）7克,；（4）9克；（5）11克,。待溶解后分裝試管,，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。

                                                                                                                                           本篇轉(zhuǎn)載至實(shí)驗(yàn)之家